ຂໍຂອບໃຈທ່ານສໍາລັບການຢ້ຽມຢາມ Nature.com.ເວີຊັນຂອງຕົວທ່ອງເວັບທີ່ທ່ານກໍາລັງໃຊ້ມີການສະຫນັບສະຫນູນ CSS ຈໍາກັດ.ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ບຣາວເຊີເວີຊັ່ນໃໝ່ກວ່າ (ຫຼືປິດການນຳໃຊ້ໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer).ໃນເວລານີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະຫນັບສະຫນູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາກໍາລັງສະແດງເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບຫຼື JavaScript.
ການຄົ້ນພົບແລະການນໍາໃຊ້ທີ່ເປັນປະໂຫຍດຂອງຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດສາມາດຊ່ວຍປັບປຸງຊີວິດຂອງມະນຸດ.ສານເຄມີຢັບຢັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຢາຂ້າຫຍ້າເພື່ອຄວບຄຸມວັດສະພືດ.ເນື່ອງຈາກຄວາມຕ້ອງການທີ່ຈະນໍາໃຊ້ຢາຂ້າຫຍ້າປະເພດຕ່າງໆ, ຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ກໍານົດທາດປະສົມທີ່ມີກົນໄກໃຫມ່ຂອງການປະຕິບັດ.ໃນການສຶກສານີ້, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະສົມ N -alkoxypyrrole ນະວະນິຍາຍ, coumamonamide, ຈາກ Streptomyces werraensis MK493-CF1 ແລະສ້າງຂະບວນການສັງເຄາະທີ່ສົມບູນ.ໂດຍຜ່ານການວິເຄາະກິດຈະກໍາທາງຊີວະພາບ, ພວກເຮົາຄົ້ນພົບວ່າອາຊິດ urs-monoamic ແມ່ນຕົວກາງສັງເຄາະຂອງ urs-monoamide ແລະເປັນທ່າແຮງ.ຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດ.ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາອະນຸພັນອາຊິດ urbenonic ຕ່າງໆ, ລວມທັງ urbenyloxy derivative (UDA), ທີ່ມີກິດຈະກໍາການຂ້າຫຍ້າສູງໂດຍບໍ່ມີຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ HeLa.ພວກເຮົາຍັງໄດ້ພົບເຫັນວ່າອະນຸພັນອາຊິດ urmotonic ລົບກວນ microtubules ຂອງພືດ;ນອກຈາກນັ້ນ, KAND ມີຜົນກະທົບຕໍ່ actin filaments ແລະ induces cell death;ຜົນກະທົບ multifaceted ເຫຼົ່ານີ້ແຕກຕ່າງຈາກຕົວຍັບຍັ້ງ microtubule ທີ່ຮູ້ຈັກແລະແນະນໍາກົນໄກໃຫມ່ຂອງການປະຕິບັດສໍາລັບອາຊິດ ursonic, ເຊິ່ງເປັນຕົວແທນທີ່ເປັນປະໂຫຍດທີ່ສໍາຄັນໃນການພັດທະນາຢາຂ້າຫຍ້າໃຫມ່.
ການຄົ້ນພົບແລະການປະຕິບັດຕົວຈິງຂອງຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດທີ່ເປັນປະໂຫຍດແລະອະນຸພັນຂອງມັນແມ່ນວິທີການປັບປຸງຄຸນນະພາບຂອງຊີວິດຂອງມະນຸດ.metabolites ທີສອງທີ່ຜະລິດໂດຍຈຸລິນຊີ, ພືດແລະແມງໄມ້ໄດ້ນໍາໄປສູ່ຄວາມກ້າວຫນ້າທີ່ສໍາຄັນໃນຢາປົວພະຍາດແລະການກະສິກໍາ.ຢາຕ້ານເຊື້ອແລະຢາຕ້ານມະເຮັງຫຼາຍຊະນິດໄດ້ຖືກພັດທະນາຈາກຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດ.ນອກຈາກນັ້ນ, ປະເພດຕ່າງໆຂອງຢາປາບສັດຕູພືດ, ຢາຂ້າເຊື້ອລາ ແລະ ຢາຂ້າຫຍ້າແມ່ນສະກັດຈາກຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດເຫຼົ່ານີ້ເພື່ອນໍາໃຊ້ເຂົ້າໃນການກະສິກໍາ.ໂດຍສະເພາະ, ຢາຂ້າຫຍ້າຄວບຄຸມວັດສະພືດແມ່ນເຄື່ອງມືທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບການເພີ່ມຜົນຜະລິດຂອງພືດໃນກະສິກໍາທີ່ທັນສະໄຫມ, ແລະສານປະກອບປະເພດຕ່າງໆແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ໃນການຄ້າແລ້ວ.ຂະບວນການຈຸລັງຫຼາຍຊະນິດໃນພືດ, ເຊັ່ນ: ການສັງເຄາະແສງ, ການເຜົາຜານອາຊິດ amino, ການສັງເຄາະຝາຂອງເຊນ, ລະບຽບການຂອງ mitosis, ສັນຍານ phytohormone, ຫຼືການສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນ, ຖືວ່າເປັນເປົ້າຫມາຍປົກກະຕິຂອງຢາຂ້າຫຍ້າ.ທາດປະສົມທີ່ຍັບຍັ້ງການທໍາງານຂອງ microtubule ແມ່ນປະເພດທົ່ວໄປຂອງຢາຂ້າຫຍ້າທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງພືດໂດຍຜົນກະທົບຕໍ່ລະບຽບການ mitotic2.
Microtubules ແມ່ນອົງປະກອບຂອງ cytoskeleton ແລະຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຈຸລັງ eukaryotic.tubulin heterodimer ປະກອບດ້ວຍ α-tubulin ແລະ β-tubulin ກອບເປັນຈໍານວນ protofilaments microtubule linear, ມີ 13 protofilaments ປະກອບເປັນຮູບທໍ່ກົມ.Microtubules ມີບົດບາດຫຼາຍໃນຈຸລັງຂອງພືດ, ລວມທັງການກໍານົດຮູບຮ່າງຂອງເຊນ, ການແບ່ງຈຸລັງ, ແລະການຂົນສົ່ງ intracellular3,4.ຈຸລັງພືດປະກອບດ້ວຍ microtubules ພາຍໃຕ້ເຍື່ອ plasma interphase, ແລະອັນທີ່ເອີ້ນວ່າ microtubules cortical ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນຄິດວ່າຈະຄວບຄຸມການຈັດຕັ້ງຂອງ cellulose microfibrils ຜ່ານລະບຽບການຂອງ cellulose synthase complexes4,5.Cortical microtubules ຂອງຈຸລັງ epidermal ຮາກ, ທີ່ມີຢູ່ໃນເຂດຂອງການຍືດຕົວຢ່າງໄວວາຂອງປາຍຮາກ, ຕັ້ງຢູ່ທາງຂ້າງ, ແລະ microfibers cellulose ປະຕິບັດຕາມ microtubules ເຫຼົ່ານີ້ແລະຈໍາກັດທິດທາງຂອງການຂະຫຍາຍຈຸລັງ, ດັ່ງນັ້ນການສົ່ງເສີມການຍືດຕົວຂອງເຊນ anisotropic.ດັ່ງນັ້ນ, ການທໍາງານຂອງ microtubule ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບ morphology ຂອງພືດ.ການທົດແທນອາຊິດອາມິໂນໃນພັນທຸກໍາທີ່ເຂົ້າລະຫັດ tubulin ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມບໍ່ສະດວກຂອງອາເຣ microtubule cortical ແລະການຂະຫຍາຍຕົວທາງດ້ານຊ້າຍຫຼືຂວາໃນ Arabidopsis 6,7.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການກາຍພັນໃນໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ microtubule ທີ່ຄວບຄຸມການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ຍັງສາມາດນໍາໄປສູ່ການເຕີບໂຕຂອງຮາກທີ່ບິດເບືອນ8,9,10,11,12,13.ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາຂ້າຫຍ້າທີ່ລົບກວນ microtubule ເຊັ່ນ disopyramide, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ pretilachlor, ຍັງເຮັດໃຫ້ເກີດການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກ oblique ຊ້າຍ.ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າລະບຽບທີ່ຊັດເຈນຂອງການທໍາງານ microtubule ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການກໍານົດທິດທາງຂອງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງພືດ.
ປະເພດຕ່າງໆຂອງສານຍັບຍັ້ງ microtubule ໄດ້ຖືກຄົ້ນພົບ, ແລະຢາເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ປະກອບສ່ວນທີ່ສໍາຄັນຕໍ່ການຄົ້ນຄວ້າ cytoskeletal, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການກະສິກໍາແລະຢາປົວພະຍາດ2.ໂດຍສະເພາະ, oryzalin, ທາດປະສົມ dinitroaniline, disopyramide, ທາດປະສົມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ benzamide, ແລະການປຽບທຽບຂອງພວກມັນສາມາດຍັບຍັ້ງການທໍາງານຂອງ microtubule ແລະເຮັດໃຫ້ການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດ.ເພາະສະນັ້ນ, ພວກມັນຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຢາຂ້າຫຍ້າ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເນື່ອງຈາກວ່າ microtubules ເປັນອົງປະກອບທີ່ສໍາຄັນຂອງຈຸລັງພືດແລະສັດ, inhibitors microtubule ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນ cytotoxic ກັບທັງສອງປະເພດຈຸລັງ.ດັ່ງນັ້ນ, ເຖິງວ່າຈະມີຜົນປະໂຫຍດທີ່ໄດ້ຮັບການຍອມຮັບວ່າເປັນຢາຂ້າຫຍ້າ, ຈໍານວນຈໍາກັດຂອງຕົວແທນ antimicrotubule ແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຈຸດປະສົງປະຕິບັດ.
Streptomyces ແມ່ນສະກຸນຂອງຄອບຄົວ Streptomyces, ເຊິ່ງປະກອບມີເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ aerobic, gram-positive, filamentous ແລະເປັນທີ່ຮູ້ຈັກກັນຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດລະດັບຄວາມກ້ວາງຂອງ metabolites ຂັ້ນສອງ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນໄດ້ຖືກພິຈາລະນາເປັນຫນຶ່ງໃນແຫຼ່ງທີ່ສໍາຄັນຂອງຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດທີ່ມີຊີວະວິທະຍາໃຫມ່.ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະສົມໃຫມ່ທີ່ເອີ້ນວ່າ coumamonamide, ເຊິ່ງຖືກແຍກອອກຈາກ Streptomyces werraensis MK493-CF1 ແລະ S. werraensis ISP 5486. ການນໍາໃຊ້ການວິເຄາະ spectral ແລະການວິເຄາະ spectral ຢ່າງເຕັມທີ່, ໂຄງສ້າງຂອງ coumamonamide ແມ່ນມີລັກສະນະແລະໂຄງສ້າງ N-alkoxypyrrole ເປັນເອກະລັກຂອງມັນ. ໄດ້ຖືກກໍານົດ.ການສັງເຄາະ.ອາຊິດ Ursmonic, ເປັນຕົວກາງສັງເຄາະຂອງ ursmonoamide ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ, ໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕແລະການແຕກງອກຂອງຕົ້ນແບບ Arabidopsis thaliana ທີ່ນິຍົມ.ໃນການສຶກສາຄວາມສໍາພັນໂຄງສ້າງ - ກິດຈະກໍາ, ພວກເຮົາໄດ້ພົບເຫັນວ່າສານປະສົມທີ່ມີ C9 ດັດແປງເປັນອາຊິດ ursonic, ເອີ້ນວ່າ nonyloxy derivative ຂອງອາຊິດ ursonic (KAND), ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເສີມຂະຫຍາຍຜົນກະທົບ inhibitory ການຂະຫຍາຍຕົວແລະການແຕກງອກ.ໂດຍສະເພາະແມ່ນຢາຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດທີ່ຄົ້ນພົບໃຫມ່ຍັງມີຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງຢາສູບແລະຕັບອັກເສບແລະບໍ່ແມ່ນ cytotoxic ກັບເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຫຼືຈຸລັງ HeLa.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ບາງອະນຸພັນອາຊິດ urmotonic ເຮັດໃຫ້ເກີດ phenotype ຮາກທີ່ບິດເບືອນ, ຫມາຍຄວາມວ່າອະນຸພັນເຫຼົ່ານີ້ມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຫຼືທາງອ້ອມ microtubules.ສອດຄ່ອງກັບຄວາມຄິດນີ້, ການສັງເກດການຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບ microtubules ທີ່ຕິດສະຫຼາກທັງ immunohistochemically ຫຼືດ້ວຍທາດໂປຼຕີນຈາກ fluorescent ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການປິ່ນປົວ KAND depolymerizes microtubules.ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍສານອະນຸພັນຂອງອາຊິດ kumamotonic ໄດ້ລົບກວນ microfilaments actin.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດຊະນິດ ໃໝ່ ເຊິ່ງກົນໄກການກະ ທຳ ທີ່ເປັນເອກະລັກກ່ຽວຂ້ອງກັບການທໍາລາຍ cytoskeleton.
ສາຍພັນ MK493-CF1 ຖືກແຍກອອກຈາກດິນຢູ່ Shinagawa-ku, ໂຕກຽວ.Strain MK493-CF1 ສ້າງເປັນ mycelium stromal ທີ່ມີສາຂາດີ.ລໍາດັບບາງສ່ວນຂອງ 16S ribosomal RNA gene (1422 bp) ຖືກກໍານົດ.ເມື່ອຍນີ້ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບ S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ປົກກະຕິ strain, 99.93%).ອີງຕາມຜົນໄດ້ຮັບນີ້, ມັນໄດ້ຖືກກໍານົດວ່າສາຍພັນນີ້ມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບສາຍພັນຂອງ S. werraensis.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາຈຶ່ງຕັ້ງຊື່ສາຍພັນນີ້ຊົ່ວຄາວວ່າ S. werraensis MK493-CF1.S. werraensis ISP 5486T ຍັງຜະລິດທາດປະສົມຊີວະພາບດຽວກັນ.ເນື່ອງຈາກມີການຄົ້ນຄວ້າເບື້ອງຕົ້ນພຽງເລັກນ້ອຍໃນການໄດ້ຮັບຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດຈາກຈຸລິນຊີນີ້, ການຄົ້ນຄວ້າທາງເຄມີຕື່ມອີກໄດ້ຖືກປະຕິບັດ.ຫຼັງຈາກການປູກຝັງຂອງ S. werraensis MK493-CF1 ເທິງເຂົ້າບາເລຂະຫນາດກາງໂດຍການໝັກດ້ວຍສະພາບແຂງຢູ່ທີ່ 30°C ເປັນເວລາ 14 ມື້, ເມັດກາງໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍ 50% EtOH.60 ມລຂອງຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກຕາກໃຫ້ແຫ້ງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 59.5 ມລກຂອງສານສະກັດຈາກດິບ.ສານສະກັດຈາກ crude ແມ່ນຂຶ້ນກັບ HPLC ໄລຍະປີ້ນກັບກັນເພື່ອໃຫ້ N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, ມີຊື່ວ່າ coumamonamide, 36.0 mg).ຈໍານວນທັງຫມົດ 1 ແມ່ນປະມານ 60% ຂອງສານສະກັດຈາກນ້ໍາມັນດິບ.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ຕັດສິນໃຈສຶກສາລາຍລະອຽດກ່ຽວກັບຄຸນສົມບັດຂອງ kumamotoamide 1.
Coumamonamide 1 ເປັນຝຸ່ນ amorphous ສີຂາວແລະ spectrometry ມະຫາຊົນທີ່ມີຄວາມລະອຽດສູງ (HRESIMS) ຢືນຢັນ C6H8N2O2 (ຮູບ 1).ຊິ້ນ pyrrole ທີ່ທົດແທນ C2 ຂອງທາດປະສົມນີ້ແມ່ນມີລັກສະນະ δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH ໃນ 1H NMR spectrum: 4.5 Hz. , H-5) ແລະ δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), ແລະ 13C NMR spectrum ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປະກົດຕົວຂອງສີ່ອະຕອມຄາບອນ sp2.ການປະກົດຕົວຂອງກຸ່ມ amide ຢູ່ຕໍາແຫນ່ງ C2 ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍການພົວພັນ HMBC ຈາກ C-3 proton ກັບ amide carbonyl carbon ທີ່ δC 161.1.ນອກຈາກນັ້ນ, 1 H ແລະ 13 C NMR ສູງສຸດທີ່ δH 4.10 (3H, S) ແລະ δC 68.3 ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງການມີກຸ່ມ N-methoxy ໃນໂມເລກຸນ.ເຖິງແມ່ນວ່າຕໍາແຫນ່ງທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງກຸ່ມ methoxy ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ການວິເຄາະ spectroscopic ເຊັ່ນ: ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ spectroscopy ແລະຕົວຫຍໍ້ຂອງ nuclear Overhauser (NOEDF), N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide ໄດ້ກາຍເປັນສານປະສົມທໍາອິດ.
ເພື່ອກໍານົດໂຄງສ້າງທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ 1, ການສັງເຄາະທັງຫມົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດ (ຮູບ 2a).ການປິ່ນປົວຂອງ 2-aminopyridine 2 ທີ່ມີຢູ່ໃນການຄ້າທີ່ມີ m-CPBA ເຮັດໃຫ້ N-oxide 3 ທີ່ສອດຄ້ອງກັນໃນປະລິມານຜົນຜະລິດ.ຫຼັງຈາກ 2-aminoazidation ຂອງ 2, ປະຕິກິລິຍາ cyclocondensation ທີ່ອະທິບາຍໂດຍ Abramovich ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ benzene ຢູ່ທີ່ 90 ° C ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 1-hydroxy-1H-pyrrole-2-carbonitrile 5 ທີ່ຕ້ອງການໃນກຼາມ.ຄວາມໄວ 60% (ສອງໄລຍະ).໑໕,໑໖.Methylation ແລະ hydrolysis ຂອງ 4 ຫຼັງຈາກນັ້ນໃຫ້ 1-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxylic acid (ເອີ້ນວ່າ "ອາຊິດcumotonic", 6) ໃນຜົນຜະລິດທີ່ດີ (70%, ສອງຂັ້ນຕອນ).ສຸດທ້າຍ, ການອົບຣົມຜ່ານອາຊິດ chloride intermediate 6 ໂດຍໃຊ້ aqueous ammonia ໄດ້ໃຫ້ Kumamoto amide 1 ໃນຜົນຜະລິດ 98%.ຂໍ້ມູນ spectral ທັງຫມົດຂອງ synthesized 1 ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບ isolated 1, ສະນັ້ນໂຄງສ້າງຂອງ 1 ໄດ້ຖືກກໍານົດ;
ການສັງເຄາະທົ່ວໄປແລະການວິເຄາະກິດຈະກໍາທາງຊີວະພາບຂອງ urbenamide ແລະອາຊິດ urbenic.(a) ການສັງເຄາະລວມຂອງ Kumamoto amide.(b) ເບ້ຍໄມ້ປ່າ Arabidopsis Columbia (Col) ອາຍຸ 7 ມື້ໄດ້ຖືກປູກໃສ່ແຜ່ນ Murashige ແລະ Skoog (MS) ທີ່ບັນຈຸ coumamonamide 6 ຫຼື coumamonamide 1 ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້.ແຖບຂະຫນາດ = 1 ຊມ.
ທໍາອິດ, ພວກເຮົາໄດ້ປະເມີນກິດຈະກໍາທາງຊີວະພາບຂອງ urbenamide ແລະຕົວກາງຂອງມັນສໍາລັບຄວາມສາມາດໃນການປັບຕົວຂອງພືດ.ພວກເຮົາໄດ້ເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່າງໆຂອງ ursmonamide 1 ຫຼືອາຊິດ ursmonic 6 ໃຫ້ກັບ MS agar ຂະຫນາດກາງແລະການປູກເບ້ຍ Arabidopsis thaliana ໃນຂະຫນາດກາງນີ້.ການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງ (500 μM) ຂອງ 6 inhibited ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຮາກ (ຮູບ 2b).ຕໍ່ໄປ, ພວກເຮົາສ້າງຕົວອະນຸພັນຕ່າງໆໂດຍການປ່ຽນແທນຕໍາແຫນ່ງ N1 ຂອງ 6 ແລະເຮັດການສຶກສາຄວາມສໍາພັນຂອງໂຄງສ້າງ - ກິດຈະກໍາກ່ຽວກັບພວກມັນ (ຂະບວນການສັງເຄາະ analogue ໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ໃນຂໍ້ມູນສະຫນັບສະຫນູນ (SI)).ເບ້ຍ Arabidopsis ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ມີອະນຸພັນອາຊິດ ursonic 50 μM, ແລະຄວາມຍາວຂອງຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກ.ດັ່ງທີ່ມັນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 3a, b, ແລະ S1, ອາຊິດ coumamo ມີຄວາມຍາວແຕກຕ່າງກັນຂອງຕ່ອງໂສ້ alkoxy ເສັ້ນ (9, 10, 11, 12, ແລະ 13) ຫຼືຕ່ອງໂສ້ alkoxy ຂະຫນາດໃຫຍ່ (15, 16, ແລະ 17) ຢູ່ຕໍາແຫນ່ງ N1.ອະນຸພັນໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຍັບຍັ້ງການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກ.ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາພົບເຫັນວ່າຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງ 200 μM 10, 11, ຫຼື 17 inhibited ການແຕກງອກ (ຮູບ 3c ແລະ S2).
ການສຶກສາຄວາມສໍາພັນໂຄງສ້າງ - ກິດຈະກໍາຂອງ Kumamoto amide ແລະທາດປະສົມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.(a) ໂຄງປະກອບການແລະການສັງເຄາະຂອງ analogues.(b) ປະລິມານຂອງຄວາມຍາວຂອງຮາກຂອງເບ້ຍອາຍຸ 7 ມື້ທີ່ປູກໃນຂະຫນາດກາງ MS ທີ່ມີຫຼືບໍ່ມີ 50 μM coumamonamide derivatives.ດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນກັບການປິ່ນປົວ sham (t test, p< 0.05).n>18. ຂໍ້ມູນສະແດງເປັນຄ່າສະເລ່ຍ ± SD.nt ຫມາຍຄວາມວ່າ "ບໍ່ໄດ້ທົດສອບ" ເພາະວ່າຫຼາຍກວ່າ 50% ຂອງແກ່ນບໍ່ໄດ້ແຕກງອກ.(c) ປະລິມານການແຕກງອກຂອງເມັດທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ incubated ສໍາລັບ 7 ມື້ໃນຂະຫນາດກາງ MS ທີ່ມີຫຼືບໍ່ມີ 200 μM coumamonamide ແລະສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.ດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນກັບການປິ່ນປົວ sham (ການທົດສອບ chi-square).n=96.
ຫນ້າສົນໃຈ, ການເພີ່ມຕ່ອງໂສ້ຂ້າງ alkyl ທີ່ຍາວກວ່າ C9 ຫຼຸດລົງກິດຈະກໍາ inhibitory, ແນະນໍາວ່າສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບອາຊິດ kumamotoic ຕ້ອງການຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຂອງຂະຫນາດທີ່ແນ່ນອນເພື່ອສະແດງກິດຈະກໍາທາງຊີວະພາບຂອງພວກເຂົາ.
ເນື່ອງຈາກວ່າການວິເຄາະຄວາມສໍາພັນໂຄງສ້າງ - ກິດຈະກໍາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ C9 ໄດ້ຖືກດັດແປງເປັນອາຊິດ ursonic ແລະອະນຸພັນ nonyloxy ຂອງອາຊິດ ursonic (ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າ KAND 11) ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາໄດ້ເຮັດການກໍານົດລັກສະນະລະອຽດຂອງ KAND 11. ການປິ່ນປົວ Arabidopsis. ດ້ວຍ 50 μM KAND 11 ເກືອບທັງຫມົດປ້ອງກັນການແຕກງອກ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາ (40, 30, 20, ຫຼື 10 μM) ຂອງ KAND 11 ຂັດຂວາງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຮາກໃນລັກສະນະທີ່ຂຶ້ນກັບປະລິມານ (ຮູບ 4a, b).ເພື່ອທົດສອບວ່າ KAND 11 ມີຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງຮາກ meristem, ພວກເຮົາໄດ້ກວດເບິ່ງ meristems ຮາກທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ propidium iodide (PI) ແລະວັດແທກຂະຫນາດພື້ນທີ່ meristem.ຂະຫນາດຂອງ meristem ຂອງເບ້ຍທີ່ປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ມີ 25 μM KAND-11 ແມ່ນ 151.1 ± 32.5 μm, ໃນຂະນະທີ່ຂະຫນາດຂອງ meristem ຂອງເບ້ຍທີ່ປູກໃນຕົວກາງຄວບຄຸມທີ່ມີ DMSO ແມ່ນ 264.7 ± 30.8 μm (ຮູບ 4c, d). , ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ KAND-11 ຟື້ນຟູການເຄື່ອນໄຫວຂອງເຊນ.ການແຜ່ກະຈາຍ.ຮາກ meristem.ປະຕິບັດຕາມນີ້, ການປິ່ນປົວ KAND 11 ຫຼຸດລົງຈໍານວນສັນຍານການແບ່ງຈຸລັງ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ໃນ meristem ຮາກ (ຮູບ 4e) 17 .ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ KAND 11 ຂັດຂວາງການເຕີບໂຕຂອງຮາກໂດຍການຫຼຸດຜ່ອນກິດຈະກໍາການຂະຫຍາຍຈຸລັງ.
ການວິເຄາະຜົນກະທົບ inhibitory ຂອງອາຊິດ urbenonic derivatives (urbenyloxy derivatives) ກ່ຽວກັບການຂະຫຍາຍຕົວ.(a) ເບ້ຍ Col-type ປ່າອາຍຸ 7 ວັນ ປູກໃສ່ຈານ MS ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND 11. ຂະໜາດ = 1 ຊມ.(b) ປະລິມານຂອງຄວາມຍາວຂອງຮາກ.ຕົວອັກສອນຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, ຫນ້າ< 0.05).n>16. ຂໍ້ມູນສະແດງເປັນຄ່າສະເລ່ຍ ± SD.(c) Confocal microscopy ຂອງ propidium iodide-stained wild-type Col roots ປູກຢູ່ໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີຫຼືບໍ່ມີ 25 μM KAND 11. ວົງເລັບສີຂາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຮາກ meristem.ແຖບຂະໜາດ = 100 µm.(d) ປະລິມານຂອງຂະຫນາດ meristem ຮາກ (n = 10 ຫາ 11).ຄວາມແຕກຕ່າງທາງສະຖິຕິໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ t-test (p< 0.05).ແຖບສະແດງເຖິງຂະຫນາດ meristem ສະເລ່ຍ.(e) ກ້ອງຈຸລະທັດທາງກົງກັນຂ້າມທີ່ແຕກຕ່າງ interference contrast (DIC) ຂອງ meristem ຮາກທີ່ມີໂຄງສ້າງ CDKB2;1pro: CDKB2;1-GUS ເປື່ອຍ ແລະ ເປື່ອຍໃສ່ເບ້ຍ 5 ວັນທີ່ປູກໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີ ຫຼືບໍ່ມີ 25 µM KAND assay.
phytotoxicity ຂອງ KAND 11 ໄດ້ຖືກທົດສອບຕື່ມອີກໂດຍໃຊ້ພືດ dicotyledonous ອື່ນ, ຢາສູບ (Nicotiana tabacum), ແລະອົງການຈັດຕັ້ງຕົວແບບຂອງພືດທີ່ດິນທີ່ສໍາຄັນ, liverwort (Marchantia polymorpha).ເຊັ່ນດຽວກັບໃນກໍລະນີຂອງ Arabidopsis, ເບ້ຍຢາສູບ SR-1 ປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ມີ 25 μM KAND 11 ຜະລິດຮາກສັ້ນກວ່າ (ຮູບ 5a).ນອກຈາກນັ້ນ, 40 ໃນຈໍານວນ 48 ເມັດທີ່ແຕກງອກຢູ່ໃນແຜ່ນທີ່ມີ 200 μM KAND 11, ໃນຂະນະທີ່ທັງຫມົດ 48 ເມັດໄດ້ແຕກງອກຢູ່ໃນສື່ທີ່ເຮັດດ້ວຍ mock, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND ສູງກວ່າແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນ (p.< 0.05;chi test -square) inhibited ການແຕກງອກຂອງຢາສູບ.(ຮູບ 5b).ນອກຈາກນັ້ນ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ KAND 11 ທີ່ຂັດຂວາງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍໃນ liverwort ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນ Arabidopsis (ຮູບ 5c).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ KAND 11 ສາມາດຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງພືດຊະນິດຕ່າງໆ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສືບສວນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ cytotoxicity ຂອງສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຫມີ monoamide ໃນສິ່ງມີຊີວິດອື່ນໆ, ຄືຈຸລັງ HeLa ຂອງມະນຸດແລະ Escherichia coli strain DH5α, ເປັນຕົວແທນຂອງຈຸລັງສັດແລະເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ສູງກວ່າ, ຕາມລໍາດັບ.ໃນຊຸດຂອງການວິເຄາະການຂະຫຍາຍຈຸລັງ, ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າ coumamonamide 1, coumamonamidic acid 6, ແລະ KAND 11 ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ HeLa ຫຼື E. coli ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 100 μM (ຮູບ 5d, e).
ການຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ KAND 11 ໃນສິ່ງມີຊີວິດທີ່ບໍ່ແມ່ນ Arabidopsis.(a) ເບ້ຍຢາສູບປ່າຊະນິດ SR-1 ອາຍຸ 2 ອາທິດຖືກປູກໃສ່ແຜ່ນ MS ທີ່ມີແນວຕັ້ງທີ່ມີ 25 μM KAND 11. (ຂ) ເບ້ຍຢາສູບປະເພດ SR-1 ປ່າອາຍຸ 2 ອາທິດແມ່ນໄດ້ປູກຢູ່ໃນແນວນອນ. ແຜ່ນ MS ທີ່ບັນຈຸ 200 μM KAND 11. (ຄ) ໜໍ່ໄມ້ປ່າຊະນິດ Tak-1 ອາຍຸສອງອາທິດທີ່ປູກຢູ່ໃນແຜ່ນ Gamborg B5 ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND 11. ລູກສອນສີແດງຊີ້ບອກເຖິງສະປໍທີ່ຢຸດເຊົາການຂະຫຍາຍຕົວພາຍໃນສອງອາທິດ. ໄລຍະເວລາ.(d) ການວິເຄາະການຂະຫຍາຍຈຸລັງຂອງເຊລ HeLa.ຈຳນວນຂອງເຊລທີ່ສາມາດໃຊ້ໄດ້ຖືກວັດແທກເປັນຊ່ວງເວລາຄົງທີ່ໂດຍໃຊ້ຊຸດນັບເຊວ 8 (Dojindo).ໃນຖານະເປັນການຄວບຄຸມ, ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍ 5 μg / ml actinomycin D (Act D), ເຊິ່ງ inhibits ການຖ່າຍທອດ RNA polymerase ແລະເຮັດໃຫ້ເກີດການເສຍຊີວິດຂອງເຊນ.ການວິເຄາະໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ triplicate.(e) ການວິເຄາະການຂະຫຍາຍຈຸລັງຂອງ E. coli.ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ E. coli ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວັດແທກ OD600.ໃນຖານະເປັນການຄວບຄຸມ, ຈຸລັງໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍ 50 μg / ml ampicillin (Amp), ເຊິ່ງຍັບຍັ້ງການສັງເຄາະຝາຂອງຈຸລັງແບັກທີເລຍ.ການວິເຄາະໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ triplicate.
ເພື່ອຖອດລະຫັດກົນໄກການປະຕິບັດຂອງ cytotoxicity ທີ່ເກີດຈາກທາດປະສົມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ uramide, ພວກເຮົາໄດ້ວິເຄາະອະນຸພັນອາຊິດ urbenic ຄືນໃໝ່ທີ່ມີຜົນກະທົບ inhibitory ປານກາງ.ດັ່ງທີ່ມັນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2b, 6a, ເບ້ຍທີ່ປູກໃນແຜ່ນ agar ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ (200 μM) ຂອງອາຊິດ urmotonic 6 ຜະລິດຮາກສັ້ນແລະໂຄ້ງຊ້າຍ (θ = – 23.7 ± 6.1), ໃນຂະນະທີ່ເບ້ຍທີ່ປູກໃນອຸປະກອນຄວບຄຸມ, ເບ້ຍຜະລິດຮາກຊື່ເກືອບ (θ = – 3.8 ± 7.1).ການຂະຫຍາຍຕົວສະຫຼຽງຕາມລັກສະນະນີ້ແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ກັນວ່າເປັນຜົນມາຈາກຄວາມຜິດປົກກະຕິຂອງ microtubules cortical14,18.ສອດຄ່ອງກັບການຄົ້ນພົບນີ້, ຢາເສບຕິດທີ່ບໍ່ສະຖຽນລະພາບຂອງ microtubule disopyramide ແລະ oryzalin ເຮັດໃຫ້ເກີດການອຽງຮາກທີ່ຄ້າຍຄືກັນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການຂະຫຍາຍຕົວຂອງພວກເຮົາ (ຮູບ 2b, 6a).ໃນເວລາດຽວກັນ, ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບອະນຸພັນອາຊິດ urmotonic ແລະຄັດເລືອກເອົາພວກມັນຈໍານວນຫນຶ່ງທີ່, ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແນ່ນອນ, ເຮັດໃຫ້ເກີດການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກ oblique.ທາດປະສົມ 8, 9, ແລະ 15 ໄດ້ປ່ຽນທິດທາງຂອງການເຕີບໂຕຂອງຮາກຢູ່ທີ່ 75 μM, 50 μM, ແລະ 40 μM, ຕາມລໍາດັບ, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າທາດປະສົມເຫຼົ່ານີ້ສາມາດທໍາລາຍ microtubules ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ (ຮູບ 2b, 6a).ພວກເຮົາຍັງໄດ້ທົດສອບອະນຸພັນອາຊິດ ursolic ທີ່ມີທ່າແຮງທີ່ສຸດ, KAND 11, ໃນລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາ (15 µM) ແລະພົບວ່າການນໍາໃຊ້ຂອງ KAND 11 ຂັດຂວາງການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກແລະທິດທາງຂອງການເຕີບໂຕຂອງຮາກແມ່ນບໍ່ສະເຫມີກັນ, ເຖິງແມ່ນວ່າພວກມັນມັກຈະເລື່ອນໄປທາງຊ້າຍ (. ຮູບ C3)..ເນື່ອງຈາກວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງຢາຕ້ານອະນຸມູນອິສະລະ microtubule ບາງຄັ້ງກໍ່ຂັດຂວາງການເຕີບໂຕຂອງພືດແທນທີ່ຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການອຽງຂອງຮາກ, ຕໍ່ມາພວກເຮົາໄດ້ປະເມີນຄວາມເປັນໄປໄດ້ທີ່ KAND 11 ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules ໂດຍການສັງເກດເບິ່ງ microtubules cortical ໃນຈຸລັງ epidermal ຮາກ.Immunohistochemistry ໂດຍໃຊ້ anti-β-tubulin antibodies ໃນຈຸລັງ epidermal ຂອງຮາກເບ້ຍທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ 25 μM KAND 11 ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການຫາຍຕົວຂອງເກືອບທັງຫມົດ microtubules cortical ໃນຈຸລັງ epidermal ໃນເຂດການຍືດຕົວ (ຮູບ 6b).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອາຊິດ kumamotonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນປະຕິບັດໂດຍກົງຫຼືໂດຍທາງອ້ອມຕໍ່ microtubules ເພື່ອລົບກວນພວກມັນແລະສານປະກອບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນ inhibitors microtubule ໃຫມ່.
ອາຊິດ Ursonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນປ່ຽນແປງ microtubules cortical ໃນ Arabidopsis thaliana.(a) ມຸມ inclination ຂອງຮາກທີ່ວັດແທກຢູ່ໃນທີ່ປະທັບຂອງອະນຸພັນອາຊິດ urmotonic ຕ່າງໆຢູ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້.ຜົນກະທົບຂອງສອງທາດປະສົມທີ່ຮູ້ຈັກໃນການຍັບຍັ້ງ microtubules: disopyramide ແລະ oryzalin ຍັງໄດ້ຖືກວິເຄາະ.inset ສະແດງໃຫ້ເຫັນມາດຕະຖານທີ່ໃຊ້ໃນການວັດແທກມຸມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຮາກ.ດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນກັບການປິ່ນປົວ sham (t test, p< 0.05).n>19. ແຖບຂະໜາດ = 1 ຊມ.(b) Cortical microtubules ໃນຈຸລັງ epidermal ໃນເຂດການຍືດຕົວ.Microtubules ໃນຮາກ Arabidopsis Col ປະເພດທໍາມະຊາດທີ່ປູກຢູ່ໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີຫຼືບໍ່ມີ 25 μM KAND 11 ໄດ້ຖືກເບິ່ງເຫັນໂດຍການສີຍ້ອມດ້ວຍ immunohistochemical ໂດຍໃຊ້ β-tubulin primary antibodies ແລະ Alexa Fluor-conjugated second antibodies.ແຖບຂະໜາດ = 10 µm.(c) ໂຄງປະກອບການ mitotic ຂອງ microtubules ໃນ meristem ຮາກ.Microtubules ໄດ້ຖືກເບິ່ງເຫັນໂດຍໃຊ້ການຍ້ອມສີ immunohistochemical.ໂຄງສ້າງ mitotic, ລວມທັງເຂດ prophase, spindles, ແລະ phragmoplasts, ຖືກນັບຈາກຮູບພາບ confocal.ລູກສອນຊີ້ບອກໂຄງສ້າງ microtubule mitotic.ດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນກັບການປິ່ນປົວ sham (t test, p< 0.05).n>9. ແຖບຂະໜາດ = 50 µm.
ເຖິງແມ່ນວ່າ Ursa ມີຄວາມສາມາດຂັດຂວາງການເຮັດວຽກຂອງ microtubule, ກົນໄກການປະຕິບັດຂອງມັນຄາດວ່າຈະແຕກຕ່າງຈາກຕົວແທນ depolymerizing microtubule ປົກກະຕິ.ຕົວຢ່າງ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ສູງຂຶ້ນຂອງຕົວແທນ depolymerizing microtubule ເຊັ່ນ disopyramide ແລະ oryzalin ເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍ anisotropic ຂອງຈຸລັງ epidermal, ໃນຂະນະທີ່ KAND 11 ບໍ່ມີ.ນອກຈາກນັ້ນ, ການໃຊ້ຮ່ວມກັນຂອງ KAND 11 ແລະ disopyramide ເຮັດໃຫ້ມີການຕອບໂຕ້ການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກທີ່ເກີດຈາກ disopyramide ປະສົມປະສານແລະການຍັບຍັ້ງການເຕີບໃຫຍ່ຂອງ KAND 11 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ (ຮູບ S4).ພວກເຮົາຍັງໄດ້ວິເຄາະການຕອບສະຫນອງຂອງ hypersensitive disopyramide 1-1 (phs1-1) mutant ກັບ KAND 11. phs1-1 ມີການກາຍພັນຂອງຈຸດ tubulin kinase ທີ່ບໍ່ແມ່ນ canonical ແລະຜະລິດຮາກສັ້ນກວ່າເມື່ອໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ disopyramide9,20.phs1-1 ເບ້ຍ mutant ປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງ agar ທີ່ມີ KAND 11 ມີຮາກສັ້ນກວ່າຄ້າຍຄືກັນກັບການປູກໃນ disopyramid (ຮູບ S5).
ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສັງເກດເຫັນໂຄງສ້າງຂອງ microtubule mitotic, ເຊັ່ນ: ເຂດ prophase, spindles, ແລະ phragmoplasts, ໃນ meristem ຮາກຂອງເບ້ຍທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11. ສອດຄ່ອງກັບການສັງເກດສໍາລັບ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS, ການຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນ ສັງເກດເຫັນຈໍານວນຂອງ microtubules mitotic (ຮູບ .6c).
ເພື່ອກໍານົດລັກສະນະຄວາມເປັນພິດຂອງ cytotoxicity ຂອງ KAND 11 ໃນຄວາມລະອຽດຍ່ອຍ, ພວກເຮົາໄດ້ປະຕິບັດກັບຈຸລັງ suspension ຢາສູບ BY-2 ດ້ວຍ KAND 11 ແລະສັງເກດເຫັນການຕອບສະຫນອງຂອງມັນ.ພວກເຮົາທໍາອິດໄດ້ເພີ່ມ KAND 11 ໃສ່ BY-2 ຈຸລັງທີ່ສະແດງອອກ TagRFP-TUA6, ເຊິ່ງ fluorescently ຕິດປ້າຍ microtubules, ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງ KAND 11 ຕໍ່ microtubules cortical.ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ microtubule Cortical ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການວິເຄາະຮູບພາບ, ເຊິ່ງໄດ້ປະເມີນອັດຕາສ່ວນຂອງ pixels cytoskeletal ໃນບັນດາ pixels cytoplasmic.ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການວິເຄາະໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND 11 ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ, ຄວາມຫນາແຫນ້ນໄດ້ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເຖິງ 0.94 ± 0.74% ຫຼື 0.23 ± 0.28%, ຕາມລໍາດັບ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DMSO , ຈໍານວນ 61 ± .1 . % (ຮູບ 7a).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບການສັງເກດໃນ Arabidopsis ວ່າການປິ່ນປົວ KAND 11 induces depolymerization ຂອງ microtubules cortical (ຮູບ 6b).ພວກເຮົາຍັງໄດ້ກວດເບິ່ງເສັ້ນ BY-2 ທີ່ມີປ້າຍຊື່ GFP-ABD-filaments actin ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ KAND 11 ດຽວກັນແລະສັງເກດເຫັນວ່າການປິ່ນປົວ KAND 11 ຂັດຂວາງ filaments actin.ການປິ່ນປົວດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND 11 ສໍາລັບ 1 h ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ actin filament ກັບ 1.20 ± 0.62% ຫຼື 0.61 ± 0.26%, ຕາມລໍາດັບ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມຫນາແຫນ້ນໃນຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DMSO ແມ່ນ 1.69 ± 0.5% (2.000).7b).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ກົງກັນຂ້າມກັບຜົນກະທົບຂອງ propyzamide, ເຊິ່ງບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ actin filaments, ແລະ latrunculin B, actin depolymerizer ທີ່ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules (SI ຮູບ S6).ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍ coumamonamide 1, coumamonamide acid 6, ຫຼື KAND 11 ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules ໃນຈຸລັງ HeLa (SI ຮູບ S7).ດັ່ງນັ້ນ, ກົນໄກການປະຕິບັດຂອງ KAND 11 ແມ່ນເຊື່ອວ່າແຕກຕ່າງຈາກຕົວລົບກວນ cytoskeleton ທີ່ຮູ້ຈັກ.ນອກຈາກນັ້ນ, ການສັງເກດດ້ວຍກ້ອງຈຸລະທັດຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ໄດ້ເປີດເຜີຍການເລີ່ມຕົ້ນຂອງການຕາຍຂອງເຊນໃນລະຫວ່າງການປິ່ນປົວ KAND 11 ແລະສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າອັດຕາສ່ວນຂອງຈຸລັງຕາຍທີ່ມີຮອຍເປື້ອນສີຟ້າຂອງ Evans ບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຫຼັງຈາກ 30 ນາທີຂອງການປິ່ນປົວ KAND 11, ໃນຂະນະທີ່. ຫຼັງຈາກ 90 ນາທີຂອງການປິ່ນປົວດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND, ຈໍານວນຈຸລັງຕາຍເພີ່ມຂຶ້ນເຖິງ 43.7% ຫຼື 80.1% ຕາມລໍາດັບ (ຮູບ 7c).ຮ່ວມກັນ, ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພັນອາຊິດ ursolic ໃຫມ່ KAND 11 ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງ cytoskeletal ສະເພາະຂອງພືດທີ່ມີກົນໄກການປະຕິບັດທີ່ບໍ່ຮູ້ມາກ່ອນ.
KAND ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules cortical, filaments actin, ແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງຈຸລັງຢາສູບ BY-2.(a) ການເບິ່ງເຫັນຂອງ microtubules cortical ໃນຈຸລັງ BY-2 ໃນທີ່ປະທັບຂອງ TagRFP-TUA6.ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal.ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ microtubule Cortical ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຈາກ micrographs ຂອງ 25 ຈຸລັງເອກະລາດ.ຕົວອັກສອນຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, ຫນ້າ< 0.05).ແຖບຂະຫນາດ = 10 µm.(b) ເສັ້ນໃຍ Cortical actin ໃນ BY-2 ເຊັລທີ່ເຫັນພາບໃນທີ່ປະທັບຂອງ GFP-ABD2.ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal.ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ filaments cortical actin ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຈາກ micrographs ຂອງ 25 ຈຸລັງເອກະລາດ.ຕົວອັກສອນຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, ຫນ້າ< 0.05).ແຖບຂະໜາດ = 10 µm.(c) ການສັງເກດເຊັລ BY-2 ທີ່ຕາຍແລ້ວໂດຍ Evans blue staining.ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດກາໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດພາກສະຫນາມສົດໃສ.n=3.ແຖບຂະໜາດ = 100 µm.
ການຄົ້ນພົບແລະນໍາໃຊ້ຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດໃຫມ່ໄດ້ນໍາໄປສູ່ຄວາມກ້າວຫນ້າທີ່ສໍາຄັນໃນດ້ານຕ່າງໆຂອງຊີວິດຂອງມະນຸດ, ລວມທັງການແພດແລະການກະສິກໍາ.ການຄົ້ນຄວ້າປະຫວັດສາດໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອໃຫ້ໄດ້ທາດປະສົມທີ່ເປັນປະໂຫຍດຈາກຊັບພະຍາກອນທໍາມະຊາດ.ໂດຍສະເພາະ, actinomycetes ແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ຈັກທີ່ຈະເປັນປະໂຫຍດເປັນຢາຕ້ານເຊື້ອ antiparasitic ສໍາລັບ nematodes ເນື່ອງຈາກຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດ metabolites ທີສອງເຊັ່ນ: avermectin, ທາດປະສົມຂອງ ivermectin ແລະ bleomycin ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ, ໃຊ້ເປັນຢາຕ້ານມະເຮັງ21,22.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ຄວາມຫລາກຫລາຍຂອງສານປະກອບຢາຂ້າຫຍ້າໄດ້ຖືກຄົ້ນພົບຈາກ actinomycetes, ເຊິ່ງບາງອັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ແລ້ວໃນການຄ້າ1,23.ດັ່ງນັ້ນ, ການວິເຄາະ metabolites actinomycete ເພື່ອແຍກຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດທີ່ມີກິດຈະກໍາທາງຊີວະພາບທີ່ຕ້ອງການແມ່ນຖືວ່າເປັນຍຸດທະສາດທີ່ມີປະສິດທິພາບ.ໃນການສຶກສານີ້, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະສົມໃຫມ່, coumamonamide, ຈາກ S. werraensis ແລະສໍາເລັດການສັງເຄາະມັນ.ອາຊິດ Ursonic ແມ່ນຕົວກາງສັງເຄາະຂອງ urbenamide ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ.ມັນສາມາດເຮັດໃຫ້ຮາກ curling ມີລັກສະນະ, ສະແດງກິດຈະກໍາຢາຂ້າຫຍ້າປານກາງເຖິງທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ແລະໂດຍກົງຫຼືທາງອ້ອມທໍາລາຍ microtubules ຂອງພືດ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ກົນໄກການປະຕິບັດຂອງອາຊິດ urmotonic ອາດຈະແຕກຕ່າງຈາກຕົວຍັບຍັ້ງ microtubule ທີ່ມີຢູ່, ນັບຕັ້ງແຕ່ KAND 11 ຍັງຂັດຂວາງເສັ້ນໃຍ actin ແລະເຮັດໃຫ້ເກີດການເສຍຊີວິດຂອງເຊນ, ແນະນໍາກົນໄກກົດລະບຽບທີ່ອາຊິດ urmotonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນມີອິດທິພົນຕໍ່ໂຄງສ້າງ cytoskeletal ຢ່າງກວ້າງຂວາງ..
ລັກສະນະລະອຽດເພີ່ມເຕີມຂອງອາຊິດ urbenonic ຈະຊ່ວຍໃຫ້ເຂົ້າໃຈກົນໄກການປະຕິບັດຂອງອາຊິດ urbenonic.ໂດຍສະເພາະ, ເປົ້າຫມາຍຕໍ່ໄປແມ່ນເພື່ອປະເມີນຄວາມສາມາດຂອງອາຊິດ ursonic ໃນການຜູກມັດກັບ microtubules ຫຼຸດລົງເພື່ອກໍານົດວ່າອາຊິດ ursonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນປະຕິບັດໂດຍກົງຕໍ່ microtubules ແລະ depolymerize ພວກມັນ, ຫຼືວ່າການປະຕິບັດຂອງມັນເຮັດໃຫ້ microtubule destabilization.ນອກຈາກນັ້ນ, ໃນກໍລະນີທີ່ microtubules ບໍ່ແມ່ນເປົ້າຫມາຍໂດຍກົງ, ການກໍານົດສະຖານທີ່ປະຕິບັດແລະເປົ້າຫມາຍໂມເລກຸນຂອງອາຊິດ ursonic ໃນຈຸລັງພືດຈະຊ່ວຍໃຫ້ເຂົ້າໃຈຕື່ມອີກກ່ຽວກັບຄຸນສົມບັດຂອງທາດປະສົມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງແລະວິທີການທີ່ເປັນໄປໄດ້ເພື່ອປັບປຸງກິດຈະກໍາຢາຂ້າຫຍ້າ.ການວິເຄາະທາງຊີວະພາບຂອງພວກເຮົາໄດ້ເປີດເຜີຍຄວາມສາມາດ cytotoxic ທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງອາຊິດ ursonic ໃນການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດເຊັ່ນ: Arabidopsis thaliana, ຢາສູບ ແລະ liverwort, ໃນຂະນະທີ່ບໍ່ມີຈຸລັງ E. coli ຫຼື HeLa ໄດ້ຮັບຜົນກະທົບ.ຄວາມເປັນພິດໜ້ອຍ ຫຼືບໍ່ມີຕໍ່ຈຸລັງສັດແມ່ນຂໍ້ໄດ້ປຽບຂອງອະນຸພັນອາຊິດ ursonic ຖ້າພວກມັນຖືກພັດທະນາເປັນຢາຂ້າຫຍ້າເພື່ອນຳໃຊ້ໃນພື້ນທີ່ກະເສດທີ່ເປີດ.ແທ້ຈິງແລ້ວ, ເນື່ອງຈາກວ່າ microtubules ແມ່ນໂຄງສ້າງທົ່ວໄປໃນ eukaryotes, ການຍັບຍັ້ງການເລືອກຂອງພວກມັນໃນພືດແມ່ນຄວາມຕ້ອງການທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບຢາຂ້າຫຍ້າ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, propyzamide, ຕົວແທນ depolymerizing microtubule ທີ່ຜູກມັດໂດຍກົງກັບ tubulin ແລະ inhibits polymerization, ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຢາຂ້າຫຍ້າເນື່ອງຈາກຄວາມເປັນພິດຕ່ໍາຕໍ່ກັບຈຸລັງສັດ24.ໃນທາງກົງກັນຂ້າມກັບ disopyramide, benzamides ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງມີຄວາມສະເພາະເປົ້າຫມາຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ນອກເຫນືອໄປຈາກ microtubules ຂອງພືດ, RH-4032 ຫຼື benzoxamide ຍັງຍັບຍັ້ງ microtubules ຂອງຈຸລັງສັດຫຼື oomycetes, ຕາມລໍາດັບ, ແລະ zalilamide ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ fungicide ເນື່ອງຈາກ phytotoxicity ຕ່ໍາຂອງມັນ 25,26,27.ຫມີທີ່ຄົ້ນພົບໃຫມ່ແລະອະນຸພັນຂອງມັນສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງ cytotoxicity ທີ່ມີການຄັດເລືອກຕໍ່ກັບພືດ, ແຕ່ວ່າມັນເປັນມູນຄ່າທີ່ສັງເກດວ່າການດັດແກ້ເພີ່ມເຕີມອາດຈະປ່ຽນແປງຄວາມສະເພາະຂອງເປົ້າຫມາຍຂອງມັນ, ອາດຈະເປັນການສະຫນອງອະນຸພັນເພີ່ມເຕີມສໍາລັບການຄວບຄຸມເຊື້ອເຫັດທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຫຼື oomycetes.
ຄຸນສົມບັດທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງອາຊິດ urbenonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນແມ່ນເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການພັດທະນາຂອງພວກມັນເປັນຢາຂ້າຫຍ້າແລະນໍາໃຊ້ເປັນເຄື່ອງມືຄົ້ນຄ້ວາ.ຄວາມສໍາຄັນຂອງ cytoskeleton ໃນການຄວບຄຸມຮູບຮ່າງຂອງຈຸລັງພືດແມ່ນໄດ້ຮັບການຍອມຮັບຢ່າງກວ້າງຂວາງ.ການສຶກສາກ່ອນຫນ້ານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພືດໄດ້ພັດທະນາກົນໄກສະລັບສັບຊ້ອນຂອງອົງການຈັດຕັ້ງ microtubule cortical ໂດຍການຄວບຄຸມການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ເພື່ອຄວບຄຸມ morphogenesis ຢ່າງຖືກຕ້ອງ.ຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງໂມເລກຸນທີ່ຮັບຜິດຊອບສໍາລັບລະບຽບການຂອງກິດຈະກໍາ microtubule ໄດ້ຖືກກໍານົດ, ແລະການຄົ້ນຄວ້າທີ່ກ່ຽວຂ້ອງແມ່ນຍັງດໍາເນີນຢູ່ 3,4,28.ຄວາມເຂົ້າໃຈໃນປະຈຸບັນຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ໃນຈຸລັງພືດບໍ່ໄດ້ອະທິບາຍຢ່າງເຕັມສ່ວນກ່ຽວກັບກົນໄກຂອງອົງການຈັດຕັ້ງ microtubule cortical.ຕົວຢ່າງ, ເຖິງແມ່ນວ່າທັງ disopyramide ແລະ oryzalin ສາມາດ depolymerize microtubules, disopyramide ເຮັດໃຫ້ເກີດການບິດເບືອນຮາກທີ່ຮ້າຍແຮງໃນຂະນະທີ່ oryzalin ມີຜົນກະທົບທີ່ຂ້ອນຂ້າງອ່ອນໆ.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການກາຍພັນໃນ tubulin, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ microtubules ຄົງຕົວ, ຍັງເຮັດໃຫ້ເກີດການ dextrorotation ໃນຮາກ, ໃນຂະນະທີ່ paclitaxel, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ສະຖຽນລະພາບຂອງ microtubules, ບໍ່ໄດ້.ດັ່ງນັ້ນ, ການສຶກສາແລະການກໍານົດເປົ້າຫມາຍໂມເລກຸນຂອງອາຊິດ ursolic ຄວນໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈໃຫມ່ກ່ຽວກັບກົດລະບຽບຂອງ microtubules cortical ຂອງພືດ.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການປຽບທຽບໃນອະນາຄົດຂອງສານເຄມີທີ່ມີປະສິດທິຜົນໃນການສົ່ງເສີມການເຕີບໂຕທີ່ບິດເບືອນ, ເຊັ່ນ: disopyramide, ແລະສານເຄມີທີ່ມີປະສິດທິຜົນຫນ້ອຍເຊັ່ນ oryzalin ຫຼືອາຊິດ kumamotoric, ຈະໃຫ້ຂໍ້ຄຶດກ່ຽວກັບວິທີການເຕີບໂຕທີ່ບິດເບືອນເກີດຂື້ນ.
ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການຈັດລຽງ cytoskeletal ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການປ້ອງກັນແມ່ນຄວາມເປັນໄປໄດ້ອີກອັນຫນຶ່ງທີ່ຈະອະທິບາຍເຖິງຄວາມເປັນພິດຂອງອາຊິດ ursonic.ການຕິດເຊື້ອຂອງເຊື້ອພະຍາດຫຼືການນໍາ elicitor ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງພືດບາງຄັ້ງເຮັດໃຫ້ເກີດການທໍາລາຍຂອງ cytoskeleton ແລະການເສຍຊີວິດຂອງເຊນຕໍ່ມາ29.ຕົວຢ່າງ, cryptoxanthin ທີ່ມາຈາກ oomycete ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າລົບກວນ microtubules ແລະ actin filaments ກ່ອນທີ່ຈະເສຍຊີວິດຂອງເຊນຢາສູບ, ຄ້າຍຄືກັນກັບສິ່ງທີ່ເກີດຂື້ນກັບການປິ່ນປົວ KAND30,31.ຄວາມຄ້າຍຄືກັນລະຫວ່າງການຕອບສະຫນອງດ້ານການປ້ອງກັນແລະການຕອບສະຫນອງຂອງເຊນທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍອາຊິດ ursonic ເຮັດໃຫ້ພວກເຮົາສົມມຸດວ່າພວກມັນເຮັດໃຫ້ເກີດຂະບວນການຂອງເຊນທົ່ວໄປ, ເຖິງແມ່ນວ່າຜົນກະທົບໄວແລະເຂັ້ມແຂງຂອງອາຊິດ ursonic ກວ່າ cryptoxanthin ແມ່ນເຫັນໄດ້ຊັດເຈນ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຂັດຂວາງຂອງ filaments actin ສົ່ງເສີມການຕາຍຂອງເຊນ spontaneous, ເຊິ່ງບໍ່ໄດ້ມາພ້ອມກັບການລົບກວນ microtubule ສະເຫມີ29.ນອກຈາກນັ້ນ, ມັນຍັງຈະເຫັນໄດ້ວ່າເຊື້ອພະຍາດຫຼື elicitor ເຮັດໃຫ້ເກີດການເຕີບໃຫຍ່ຂອງຮາກທີ່ບິດເບືອນ, ດັ່ງທີ່ອະນຸພັນອາຊິດ ursonic ເຮັດ.ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມຮູ້ໂມເລກຸນເຊື່ອມຕໍ່ການຕອບໂຕ້ປ້ອງກັນແລະ cytoskeleton ເປັນບັນຫາທີ່ຫນ້າສົນໃຈທີ່ຈະແກ້ໄຂ.ໂດຍການຂຸດຄົ້ນການປະກົດຕົວຂອງທາດປະສົມທີ່ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນຕ່ໍາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບອາຊິດ ursonic, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບອະນຸພັນທີ່ມີທ່າແຮງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ພວກມັນອາດຈະໃຫ້ໂອກາດເພື່ອເປົ້າຫມາຍກົນໄກຂອງເຊນທີ່ບໍ່ຮູ້ຕົວ.
ຮ່ວມກັນ, ການຄົ້ນພົບແລະການນໍາໃຊ້ທາດປະສົມໃຫມ່ທີ່ modulate ນະໂຍບາຍດ້ານ microtubule ຈະສະຫນອງວິທີການທີ່ມີປະສິດທິພາບເພື່ອແກ້ໄຂກົນໄກໂມເລກຸນທີ່ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ຕິດພັນກັບການກໍານົດຮູບຮ່າງຂອງຈຸລັງພືດ.ໃນສະພາບການນີ້, ທາດປະສົມອາຊິດ urmotonic ທີ່ພັດທະນາເມື່ອໄວໆມານີ້, ເຊິ່ງມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules ແລະ filaments actin ແລະເຮັດໃຫ້ເກີດການຕາຍຂອງເຊນ, ອາດຈະສະຫນອງໂອກາດທີ່ຈະຖອດລະຫັດການເຊື່ອມຕໍ່ລະຫວ່າງການຄວບຄຸມ microtubule ແລະກົນໄກອື່ນໆເຫຼົ່ານີ້.ດັ່ງນັ້ນ, ການວິເຄາະທາງເຄມີແລະຊີວະວິທະຍາໂດຍໃຊ້ອາຊິດ urbenonic ຈະຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາເຂົ້າໃຈກົນໄກການຄວບຄຸມໂມເລກຸນທີ່ຄວບຄຸມ cytoskeleton ຂອງພືດ.
Inoculate S. werraensis MK493-CF1 ເຂົ້າໄປໃນກະເປົ໋າ Erlenmeyer 500 mL ທີ່ມີເມັດເມັດ 110 mL ປະກອບດ້ວຍ 2% (w/v) galactose, 2% (w/v) Essence paste, 1% (w/v) Bacto ອົງປະກອບ. .-soyton (Thermo Fisher Scientific, Inc.), 0.5% (w/v) ສານສະກັດຈາກສາລີ (KOGOSTCH Co., Ltd., ຍີ່ປຸ່ນ), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 ແລະ 0.2% CaCO3 ໃນນ້ໍາ deionized.(pH 7.4 ກ່ອນການຂ້າເຊື້ອ).ແກ່ນພັນພືດໄດ້ຖືກອົບໃສ່ເຄື່ອງສັ່ນ rotary (180 rpm) ຢູ່ທີ່ 27 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 2 ມື້.ການປູກຝັງການຜະລິດໂດຍການຫມັກລັດແຂງ.ການປູກຝັງເມັດພັນ (7 ມລ) ຖືກໂອນເຂົ້າໄປໃນກະປ໋ອງ K-1 500 ມລ ບັນຈຸ 40 ກຣາມ ຂອງສື່ການຜະລິດທີ່ປະກອບດ້ວຍເຂົ້າບາເລ 15 ກຣາມ (ບໍລິສັດ MUSO, ຍີ່ປຸ່ນ) ແລະ ນໍ້າ 25 ກຣາມ (pH ບໍ່ໄດ້ປັບ. ກ່ອນການເຮັດເປັນຫມັນ).).ການຫມັກໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ 30 ° C ໃນຄວາມມືດເປັນເວລາ 14 ມື້.ອຸປະກອນການຫມັກໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍ EtOH 40 ມລ/ຂວດ ແລະ centrifuged (1500 g, 4 ° C, 10 ນາທີ).ສານສະກັດຈາກທາດໃຫຍ່ (60 ມລ) ໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງ 10% MeOH/EtOAc.ຊັ້ນອິນຊີຖືກລະເຫີຍພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນທີ່ຫຼຸດລົງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສານຕົກຄ້າງ (59.5 ມລກ), ເຊິ່ງຖືກສົ່ງກັບ HPLC ທີ່ມີ gradient elution (0–10 ນາທີ: 90%) ໃນຖັນໄລຍະປີ້ນກັບກັນ (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID 10 mm × ຍາວ 250 mm) H2O/CH3CN, 10–35 ນາທີ: 90% H2O/CH3CN ຫາ 70% H2O/CH3CN (gradient), 35–45 ນາທີ: 90% H2O/EtOH, 45–155 ນາທີ: 90% H2O /EtOH ເຖິງ 100% EtOH (gradient (gradient), 155–200 min: 100% EtOH) ໃນອັດຕາການໄຫຼຂອງ 1.5 ມລ / ນາທີ, coumamonamide (1, 36.0 mg) ຖືກແຍກອອກເປັນຝຸ່ນ amorphous ສີຂາວ.
Kumamotoamide(1);1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H).), 4.08(s, 3H);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3;ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ຄ່າຄຳນວນ: 141.0659, ຄ່າວັດແທກ: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603–1593, 1537 cm.
ເມັດ Columbia (Col-0) ໄດ້ມາຈາກສູນຊັບພະຍາກອນຊີວະພາບ Arabidopsis (ABRC) ດ້ວຍການອະນຸຍາດສໍາລັບການນໍາໃຊ້ການຄົ້ນຄວ້າ.ແກ່ນ Col-0 ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍພັນ ແລະຮັກສາໄວ້ພາຍໃຕ້ສະພາບຫ້ອງທົດລອງຂອງພວກເຮົາ ແລະໃຊ້ເປັນພືດຊະນິດ Arabidopsis ປ່າທໍາມະຊາດ.ແກ່ນ Arabidopsis ໄດ້ຖືກຂ້າເຊື້ອຢູ່ພື້ນຜິວ ແລະ ປູກຝັງຢູ່ໃນເຄິ່ງມີຄວາມເຂັ້ມແຂງ Murashige ແລະ Skoog ຂະຫນາດກາງທີ່ມີ sucrose 2% (Fujifilm Wako Pure Chemical), 0.05% (w/v) 2-(4-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) ( Fujifilm Wako Pure Chemical ).) ແລະ 1.5% agar (Fujifilm Wako Pure Chemical), pH 5.7, ທີ່ 23 °C ແລະແສງສະຫວ່າງຄົງທີ່.ແກ່ນຂອງເມັດພັນຂອງ phs1-1 ໄດ້ຖືກສະຫນອງໃຫ້ໂດຍ T. Hashimoto (ສະຖາບັນວິທະຍາສາດແລະເຕັກໂນໂລຊີ Nara).
ແກ່ນຂອງສາຍພັນ SR-1 ໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ໂດຍ T. Hashimoto (ສະຖາບັນວິທະຍາສາດ ແລະ ເຕັກໂນໂລຊີ Nara) ແລະ ໃຊ້ເປັນພືດຢາສູບປະເພດປ່າ.ແກ່ນຢາສູບໄດ້ຖືກຂ້າເຊື້ອຢູ່ພື້ນຜິວ ແລະແຊ່ນ້ໍາທີ່ບໍ່ສະອາດເປັນເວລາສາມຄືນເພື່ອສົ່ງເສີມການແຕກງອກ, ຫຼັງຈາກນັ້ນໃສ່ໃນການແກ້ໄຂທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມແຂງເຄິ່ງທີ່ມີ 2% sucrose, 0.05% (w/v) MES, ແລະ gum gellan 0.8% (Fujifilm Wako Pure Chemical) Murashige.ແລະ Skoog medium) ທີ່ມີ pH 5.7 ແລະ incubated ຢູ່ທີ່ 23 ° C ພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງຄົງທີ່.
Strain Tak-1 ໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ໂດຍ T. Kohchi (ມະຫາວິທະຍາໄລກຽວໂຕ) ແລະໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຫນ່ວຍງານທົດລອງມາດຕະຖານສໍາລັບການສຶກສາ liverwort.Gemma ແມ່ນໄດ້ມາຈາກພືດທີ່ຂ້າເຊື້ອແລ້ວນໍາໄປໃສ່ແຜ່ນ Gamborg B5 ຂະຫນາດກາງ (Fujifilm Wako Pure Chemical) ທີ່ມີ 1% sucrose ແລະ gum 0.3% ແລະ incubated ຢູ່ທີ່ 23 ° C ພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ.
Tobacco BY-2 cells (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) ສະໜອງໃຫ້ໂດຍ S. Hasezawa (ມະຫາວິທະຍາໄລໂຕກຽວ).ຈຸລັງ BY-2 ໄດ້ຖືກເຈືອຈາງ 95 ເທົ່າໃນ Linsmeier ແລະ Skoog ຂະຫນາດກາງທີ່ຖືກດັດແປງແລະເສີມປະຈໍາອາທິດດ້ວຍອາຊິດ 2,4-dichlorophenoxyacetic 32 .suspension ເຊນໄດ້ຖືກປະສົມໃສ່ເຄື່ອງ shaker rotary ທີ່ 130 rpm ຢູ່ທີ່ 27 ° C ໃນຄວາມມືດ.ລ້າງຈຸລັງດ້ວຍປະລິມານ 10 ເທົ່າຂອງຂະຫນາດກາງສົດແລະ resuspend ໃນຂະຫນາດກາງດຽວກັນ.BY-2 ເສັ້ນເຊລ transgenic ສະແດງອອກຢ່າງໝັ້ນທ່ຽງສະແດງເຄື່ອງໝາຍ microtubule TagRFP-TUA6 ຫຼືເຄື່ອງໝາຍເສັ້ນໃຍ actin GFP-ABD2 ພາຍໃຕ້ຕົວສົ່ງເສີມໄວຣັດກະລໍ່າດອກ mosaic 35S ຖືກສ້າງຂື້ນຕາມທີ່ອະທິບາຍໄວ້33,34,35.ເສັ້ນຈຸລັງເຫຼົ່ານີ້ສາມາດຖືກຮັກສາໄວ້ ແລະ synchronized ໂດຍໃຊ້ຂັ້ນຕອນທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ໃຊ້ສໍາລັບເສັ້ນເຊລ BY-2 ເດີມ.
ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກປູກຝັງຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງຂອງ Eagle (DMEM) (ເຕັກໂນໂລຢີຊີວິດ) ທີ່ຖືກດັດແປງຂອງ Dulbecco ເສີມດ້ວຍ serum bovine fetal 10%, penicillin 1.2 U/ml, ແລະ streptomycin 1.2 μg/ml ໃນ incubator 37 ° C ທີ່ມີ 5% CO2.
ການທົດລອງທັງໝົດທີ່ອະທິບາຍໄວ້ໃນໜັງສືໃບລານນີ້ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍສອດຄ່ອງກັບລະບຽບການ ແລະຂໍ້ແນະນຳດ້ານຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບຂອງຍີ່ປຸ່ນ.
ສານປະສົມໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ dimethyl sulfoxide (DMSO; Fujifilm Wako Pure Chemical) ເປັນການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບແລະເຈືອຈາງໃນຂະຫນາດກາງ MS ສໍາລັບ Arabidopsis ແລະຢາສູບຫຼື Gamborg B5 ຂະຫນາດກາງສໍາລັບ liverwort.ສໍາລັບການວິເຄາະການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງຮາກ, ຫຼາຍກວ່າ 10 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນໄດ້ຖືກນໍາໄປນໍາໄປນໍາໄປນໍາໄປນໍາໄປນໍາໄປນໍາໄປນໍາໃສ່ເມັດພືດທີ່ມີທາດປະສົມຫຼື DMSO.ແກ່ນໄດ້ຖືກ incubated ໃນຫ້ອງການຂະຫຍາຍຕົວສໍາລັບ 7 ມື້.ເບ້ຍໄດ້ຖືກຖ່າຍຮູບແລະຄວາມຍາວຂອງຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກ.ສໍາລັບການວິເຄາະການແຕກງອກຂອງ Arabidopsis, 48 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນຖືກນໍາໄປໃສ່ໃນຂະຫນາດກາງ agar ທີ່ມີສານປະສົມ 200 μM ຫຼື DMSO.ແກ່ນ Arabidopsis ຖືກປູກຢູ່ໃນຫ້ອງການຂະຫຍາຍຕົວແລະຈໍານວນເບ້ຍທີ່ແຕກງອກແມ່ນນັບ 7 ມື້ຫຼັງຈາກການແຕກງອກ (dag).ສໍາລັບການວິເຄາະການແຕກງອກຂອງຢາສູບ, 24 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນຖືກນໍາໄປຫວ່ານໃສ່ເຄື່ອງບັນຈຸ agar ທີ່ມີ 200 μM KAND ຫຼື DMSO.ແກ່ນຢາສູບໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນຫ້ອງການຂະຫຍາຍຕົວແລະຈໍານວນເບ້ຍທີ່ແຕກງອກໄດ້ຖືກນັບຫຼັງຈາກ 14 ມື້.ສໍາລັບການວິເຄາະການຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງຕັບ, 9 embryos ຈາກແຕ່ລະແຜ່ນໄດ້ຖືກ plated ໃສ່ agar medium ທີ່ປະກອບດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND ຫຼື DMSO ແລະ incubated ໃນຫ້ອງການຂະຫຍາຍຕົວສໍາລັບ 14 ມື້.
ໃຊ້ເບ້ຍທີ່ຍ້ອມດ້ວຍ 5 mg/ml propidium iodide (PI) ເພື່ອສ້າງພາບຂອງການຈັດລຽງຂອງຮາກ meristem.ສັນຍານ PI ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence ໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດສະແກນເລເຊີ confocal TCS SPE (Leica Microsystems).
ການຢັບຢັ້ງທາງເຄມີຂອງຮາກດ້ວຍ β-glucuronidase (GUS) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມພິທີການທີ່ອະທິບາຍໂດຍ Malami ແລະ Benfey36.ເບ້ຍໄດ້ຖືກສ້ອມແຊມໃນ 90% acetone ຂ້າມຄືນ, ເປື້ອນດ້ວຍ 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic acid ໃນ GUS buffer ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງແລະໃສ່ໃນການແກ້ໄຂ chloraldehyde hydrated.(8 g chloral hydrate, ນ້ໍາ 2 ມລແລະ glycerol 1 ມລ) ແລະສັງເກດເຫັນໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດທາງກົງກັນຂ້າມການແຊກແຊງທີ່ແຕກຕ່າງກັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Axio Imager M1 (Carl Zeiss).
ມຸມຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກໃສ່ເບ້ຍທີ່ມີອາຍຸ 7 ວັນທີ່ປູກຢູ່ເທິງແຜ່ນທີ່ວາງໄວ້ຕາມແນວຕັ້ງ.ການວັດແທກມຸມຂອງຮາກຈາກທິດທາງຂອງ vector gravity ໄດ້ອະທິບາຍໃນຂັ້ນຕອນ 6.
ການຈັດຕັ້ງຂອງ microtubules cortical ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນດັ່ງທີ່ອະທິບາຍ, ໂດຍມີການປັບປຸງເລັກນ້ອຍຕໍ່ອະນຸສັນຍາ 37 .Anti-β-tubulin antibody (KMX-1, Merk Millipore: MAB3408) ແລະ Alexa Fluor 488-conjugated anti-mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A32723) ຖືກໃຊ້ເປັນພູມຕ້ານທານຂັ້ນຕົ້ນ ແລະຮອງທີ່ 1:1000 ແລະ 1:100 dilutions, ຕາມລໍາດັບ.ຮູບພາບ fluorescence ໄດ້ມາໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດສະແກນເລເຊີ confocal TCS SPE (Leica Microsystems).ເອົາຮູບ Z-stack ແລະສ້າງການຄາດຄະເນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງສຸດຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.
ການທົດສອບການຂະຫຍາຍເຊນຂອງ HeLa ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ຊຸດນັບເຊນ 8 (Dojindo) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.
ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ E. coli DH5α ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວັດແທກຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງເຊນໃນວັດທະນະທໍາໂດຍໃຊ້ spectrophotometer ທີ່ 600 nm (OD600).
ອົງການຈັດຕັ້ງ cytoskeletal ໃນຈຸລັງ transgenic BY-2 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence ທີ່ມີອຸປະກອນສະແກນ confocal CSU-X1 (Yokogawa) ແລະກ້ອງຖ່າຍຮູບ sCMOS (Zyla, Andor Technology).ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ cytoskeletal ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍການວິເຄາະຮູບພາບ, ເຊິ່ງໄດ້ປະເມີນອັດຕາສ່ວນຂອງ pixels cytoskeletal ໃນບັນດາ pixels cytoplasmic ໃນຮູບພາບ confocal ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ ImageJ ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ 38,39.
ເພື່ອກວດພົບການຕາຍຂອງເຊນໃນ BY-2, aliquot ຂອງ suspension ເຊນໄດ້ຖືກ incubated ດ້ວຍ 0.05% Evans blue ສໍາລັບ 10 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ການຄັດເລືອກການຍ້ອມສີສີຟ້າ Evans ຂອງຈຸລັງທີ່ຕາຍແລ້ວແມ່ນຂຶ້ນກັບການສະກັດເອົາສີຍ້ອມຈາກຈຸລັງທີ່ມີຊີວິດຊີວາໂດຍ plasma membrane40.ຈຸລັງທີ່ມີຮອຍເປື້ອນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດພາກສະຫນາມສົດໃສ (BX53, Olympus).
ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນ DMEM ເສີມດ້ວຍ 10% FBS ໃນບ່ອນອົບທີ່ມີຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຢູ່ທີ່ 37 ° C ແລະ 5% CO2.ເຊລໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍ 100 μM KAND 11, ອາຊິດ kumamonamic 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml colcemid (Gibco), ຫຼື 100 ng/ml Nocodmaze (Sigma) ເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C.ເຊລໄດ້ຖືກແກ້ໄຂດ້ວຍ MetOH ສໍາລັບ 10 ນາທີແລະຫຼັງຈາກນັ້ນດ້ວຍ acetate ສໍາລັບ 5 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ຈຸລັງຄົງທີ່ໄດ້ຖືກອົບດ້ວຍ β-tubulin primary antibody (1D4A4, Proteintech: 66240-1) ເຈືອຈາງໃນ 0.5% BSA/PBS ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງ, ລ້າງ 3 ເທື່ອດ້ວຍ TBST, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ incubated ດ້ວຍ Alexa Fluor ພູມຕ້ານທານແບ້.488 1 ຊົ່ວໂມງ.– Mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A11001) ແລະ 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ເຈືອຈາງໃນ 0.5% BSA/PBS.ຫຼັງຈາກການລ້າງດ້ວຍ TBST ສາມເທື່ອ, ຈຸລັງທີ່ມີຮອຍເປື້ອນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນກ້ອງຈຸລະທັດປີ້ນກັບ Nikon Eclipse Ti-E.ຮູບພາບໄດ້ຖືກບັນທຶກດ້ວຍກ້ອງຖ່າຍຮູບ Hamamatsu ORCA-R2 CCD ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນໂດຍໃຊ້ຊອບແວ MetaMorph (ອຸປະກອນໂມເລກຸນ).
ເວລາປະກາດ: 17-06-2024