ຂອບໃຈທີ່ທ່ານເຂົ້າມາຢ້ຽມຊົມ Nature.com. ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບເວີຊັນທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ນັ້ນຮອງຮັບ CSS ໄດ້ຈຳກັດ. ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບເວີຊັນໃໝ່ກວ່າ (ຫຼື ປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການຮອງຮັບຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາກຳລັງສະແດງເວັບໄຊໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ຫຼື JavaScript.
ການຄົ້ນພົບ ແລະ ການນຳໃຊ້ຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດທີ່ເປັນປະໂຫຍດສາມາດຊ່ວຍປັບປຸງຊີວິດມະນຸດໄດ້. ສານເຄມີຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຢາຂ້າຫຍ້າເພື່ອຄວບຄຸມວັດຊະພືດ. ເນື່ອງຈາກຄວາມຕ້ອງການທີ່ຈະໃຊ້ຢາຂ້າຫຍ້າປະເພດຕ່າງໆ, ຈຶ່ງມີຄວາມຈຳເປັນຕ້ອງລະບຸສານປະກອບທີ່ມີກົນໄກການອອກລິດໃໝ່. ໃນການສຶກສາຄັ້ງນີ້, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະກອບ N -alkoxypyrrole ໃໝ່, coumamonamide, ຈາກ Streptomyces werraensis MK493-CF1 ແລະ ສ້າງຕັ້ງຂະບວນການສັງເຄາະທີ່ສົມບູນ. ຜ່ານການທົດສອບກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບວ່າກົດ urs-monoamic ເປັນຕົວກາງສັງເຄາະຂອງ urs-monoamide ແລະ ມີທ່າແຮງ...ຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາອະນຸພັນກົດ urbenonic ຕ່າງໆ, ລວມທັງອະນຸພັນ urbenyloxy (UDA), ເຊິ່ງມີກິດຈະກຳຂ້າຫຍ້າສູງໂດຍບໍ່ສົ່ງຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງຈຸລັງ HeLa. ພວກເຮົາຍັງພົບວ່າອະນຸພັນກົດ urmotonic ລົບກວນ microtubules ຂອງພືດ; ນອກຈາກນັ້ນ, KAND ມີຜົນກະທົບຕໍ່ເສັ້ນໃຍ actin ແລະກະຕຸ້ນການຕາຍຂອງຈຸລັງ; ຜົນກະທົບຫຼາຍດ້ານເຫຼົ່ານີ້ແຕກຕ່າງຈາກຜົນກະທົບຂອງຕົວຍັບຍັ້ງ microtubule ທີ່ຮູ້ຈັກ ແລະແນະນຳກົນໄກການອອກລິດໃໝ່ສຳລັບກົດ ursonic, ເຊິ່ງເປັນຕົວແທນຂອງຂໍ້ໄດ້ປຽບທີ່ສຳຄັນໃນການພັດທະນາຢາຂ້າຫຍ້າຊະນິດໃໝ່.
ການຄົ້ນພົບ ແລະ ການນຳໃຊ້ຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດທີ່ເປັນປະໂຫຍດ ແລະ ອະນຸພັນຂອງມັນໃນຕົວຈິງ ແມ່ນວິທີການປັບປຸງຄຸນນະພາບຊີວິດຂອງມະນຸດ. ສານປະສົມທຸຕິຍະພູມທີ່ຜະລິດໂດຍຈຸລິນຊີ, ພືດ ແລະ ແມງໄມ້ ໄດ້ນຳໄປສູ່ຄວາມກ້າວໜ້າອັນສຳຄັນໃນດ້ານການແພດ ແລະ ກະສິກຳ. ຢາຕ້ານເຊື້ອ ແລະ ຢາຕ້ານມະເຮັງຫຼາຍຊະນິດໄດ້ຖືກພັດທະນາຈາກຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດ. ນອກຈາກນັ້ນ, ຜະລິດຕະພັນຫຼາຍຊະນິດຢາປາບສັດຕູພືດ, ຢາຂ້າເຊື້ອລາ ແລະ ຢາຂ້າຫຍ້າແມ່ນສະກັດຈາກຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດເຫຼົ່ານີ້ເພື່ອນຳໃຊ້ໃນກະສິກຳ. ໂດຍສະເພາະ, ຢາຂ້າຫຍ້າຄວບຄຸມວັດຊະພືດແມ່ນເຄື່ອງມືທີ່ສຳຄັນສຳລັບການເພີ່ມຜົນຜະລິດພືດໃນກະສິກຳທີ່ທັນສະໄໝ, ແລະ ສານປະກອບຫຼາຍຊະນິດກໍ່ຖືກນຳໃຊ້ໃນການຄ້າແລ້ວ. ຂະບວນການຂອງຈຸລັງຫຼາຍຢ່າງໃນພືດ, ເຊັ່ນ: ການສັງເຄາະແສງ, ການເຜົາຜານກົດອະມິໂນ, ການສັງເຄາະຜະໜັງຈຸລັງ, ການຄວບຄຸມໄມໂທຊິສ, ການສົ່ງສັນຍານຮໍໂມນໄຟໂຕ, ຫຼື ການສັງເຄາະໂປຣຕີນ, ຖືກຖືວ່າເປັນເປົ້າໝາຍທົ່ວໄປຂອງຢາຂ້າຫຍ້າ. ສານປະກອບທີ່ຍັບຍັ້ງການເຮັດວຽກຂອງໄມໂຄຣທູບູລແມ່ນຢາຂ້າຫຍ້າທົ່ວໄປທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດໂດຍຜົນກະທົບຕໍ່ການຄວບຄຸມໄມໂທຊິສ2.
ໄມໂຄຣທູບູລ (Microtubules) ແມ່ນສ່ວນປະກອບຂອງໂຄງກະດູກຂອງຈຸລັງ ແລະ ຖືກອະນຸລັກໄວ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຈຸລັງຢູຄາຣີໂອດ. ທູບູລິນເຮເຕີໂຣໄດເມີປະກອບດ້ວຍ α-ທູບູລິນ ແລະ β-ທູບູລິນ ປະກອບເປັນໂປຣໂຕຟິລາເມັນຂອງໄມໂຄຣທູບູລເສັ້ນຊື່, ໂດຍມີໂປຣໂຕຟິລາເມັນ 13 ຊະນິດປະກອບເປັນໂຄງສ້າງຮູບຊົງກະບອກ. ໄມໂຄຣທູບູລມີບົດບາດຫຼາຍຢ່າງໃນຈຸລັງພືດ, ລວມທັງການກຳນົດຮູບຮ່າງຂອງຈຸລັງ, ການແບ່ງຈຸລັງ, ແລະ ການຂົນສົ່ງພາຍໃນຈຸລັງ3,4. ຈຸລັງພືດມີໄມໂຄຣທູບູລຢູ່ໃຕ້ເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງລະຫວ່າງໄລຍະ, ແລະ ສິ່ງທີ່ເອີ້ນວ່າໄມໂຄຣທູບູລໃນຊັ້ນເປືອກສະໝອງເຫຼົ່ານີ້ ເຊື່ອກັນວ່າຄວບຄຸມການຈັດລະບຽບຂອງໄມໂຄຣໄຟບຣິລເຊລລູໂລສຜ່ານການຄວບຄຸມຂອງສະລັບສັບຊ້ອນເຊລລູໂລສສັງເຄາະ4,5. ໄມໂຄຣທູບູລໃນຊັ້ນເປືອກສະໝອງຂອງຈຸລັງຜິວໜັງຮາກ, ມີຢູ່ໃນເຂດທີ່ມີການຍືດຕົວຢ່າງໄວວາຂອງປາຍຮາກ, ຕັ້ງຢູ່ຂ້າງໆ, ແລະ ໄມໂຄຣໄມໂຄຣເຊລລູໂລສຈະຕິດຕາມໄມໂຄຣທູບູລເຫຼົ່ານີ້ ແລະ ຈຳກັດທິດທາງຂອງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສົ່ງເສີມການຍືດຕົວຂອງຈຸລັງແບບແອນໄອໂຊໂທຣປິກ. ດັ່ງນັ້ນ, ໜ້າທີ່ຂອງໄມໂຄຣທູບູລຈຶ່ງກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບຮູບຮ່າງຂອງພືດ. ການທົດແທນກົດອະມິໂນໃນຍີນທີ່ເຂົ້າລະຫັດ tubulin ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມອຽງຂອງອາເຣ microtubule cortical ແລະການເຕີບໂຕທາງດ້ານຊ້າຍ ຫຼື ຂວາໃນ Arabidopsis 6,7. ໃນທຳນອງດຽວກັນ, ການກາຍພັນໃນໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ microtubule ທີ່ຄວບຄຸມການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ຍັງສາມາດນຳໄປສູ່ການເຕີບໂຕຂອງຮາກທີ່ບິດເບືອນ8,9,10,11,12,13. ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາຂ້າຫຍ້າທີ່ລົບກວນ microtubule ເຊັ່ນ disopyramide, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ pretilachlor, ຍັງເຮັດໃຫ້ເກີດການເຕີບໂຕຂອງຮາກອຽງທາງດ້ານຊ້າຍ14. ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ບອກວ່າການຄວບຄຸມທີ່ຊັດເຈນຂອງໜ້າທີ່ຂອງ microtubule ແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍສຳລັບການກຳນົດທິດທາງຂອງການເຕີບໂຕຂອງພືດ.
ໄດ້ມີການຄົ້ນພົບຢາຍັບຍັ້ງໄມໂຄຣທູບູລຫຼາຍຊະນິດ, ແລະຢາເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ປະກອບສ່ວນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ການຄົ້ນຄວ້າໂຄງກະດູກຈຸລັງ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບກະສິກຳ ແລະ ການແພດ2. ໂດຍສະເພາະ, ອໍຣີຊາລິນ, ສານປະກອບໄດນິໂທຣອານີລີນ, ໄດໂຊພີຣາໄມດ໌, ສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເບນຊາໄມດ໌, ແລະສານທີ່ຄ້າຍຄືກັນຂອງມັນສາມາດຍັບຍັ້ງການເຮັດວຽກຂອງໄມໂຄຣທູບູລ ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດ. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກມັນຈຶ່ງຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຢາຂ້າຫຍ້າ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເນື່ອງຈາກໄມໂຄຣທູບູລເປັນສ່ວນປະກອບທີ່ສຳຄັນຂອງຈຸລັງພືດ ແລະ ສັດ, ຢາຍັບຍັ້ງໄມໂຄຣທູບູລສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນເປັນພິດຕໍ່ຈຸລັງທັງສອງຊະນິດ. ດັ່ງນັ້ນ, ເຖິງວ່າຈະມີປະໂຫຍດທີ່ໄດ້ຮັບການຍອມຮັບວ່າເປັນຢາຂ້າຫຍ້າ, ແຕ່ມີຢາຕ້ານໄມໂຄຣທູບູລຈຳນວນຈຳກັດທີ່ໃຊ້ເພື່ອຈຸດປະສົງຕົວຈິງ.
Streptomyces ແມ່ນສະກຸນຂອງຄອບຄົວ Streptomyces, ເຊິ່ງປະກອບມີເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທາງກາຍະພາບ, ກຣາມບວກ, ແລະເປັນເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ມີເສັ້ນໃຍ ແລະເປັນທີ່ຮູ້ຈັກກັນຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນດ້ານຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດສານແປປ່ຽນຂັ້ນສອງທີ່ຫຼາກຫຼາຍ. ດັ່ງນັ້ນ, ມັນຖືກຖືວ່າເປັນແຫຼ່ງທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດຂອງຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທາງຊີວະພາບໃໝ່. ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະກອບໃໝ່ທີ່ເອີ້ນວ່າ coumamonamide, ເຊິ່ງຖືກແຍກອອກຈາກ Streptomyces werraensis MK493-CF1 ແລະ S. werraensis ISP 5486. ໂດຍການໃຊ້ການວິເຄາະທາງສະເປກຕຣຳ ແລະການວິເຄາະທາງສະເປກຕຣຳຢ່າງເຕັມຮູບແບບ, ໂຄງສ້າງຂອງ coumamonamide ໄດ້ຖືກກໍານົດລັກສະນະ ແລະໂຄງກະດູກ N-alkoxypyrrole ທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງມັນໄດ້ຖືກກຳນົດ. ການສັງເຄາະ. ກົດ Ursmonic, ເຊິ່ງເປັນຕົວກາງສັງເຄາະຂອງ ursmonoamide ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ, ໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕ ແລະ ການແຕກງອກຂອງພືດຕົວແບບທີ່ນິຍົມ Arabidopsis thaliana. ໃນການສຶກສາຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງໂຄງສ້າງ ແລະ ກິດຈະກຳ, ພວກເຮົາພົບວ່າສານປະກອບທີ່ມີ C9 ທີ່ຖືກດັດແປງເປັນກົດ ursonic, ທີ່ເອີ້ນວ່າອະນຸພັນ nonyloxy ຂອງກົດ ursonic (KAND), ຊ່ວຍເສີມສ້າງຜົນກະທົບຍັບຍັ້ງຕໍ່ການເຕີບໂຕ ແລະ ການແຕກງອກຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ສິ່ງທີ່ໜ້າສັງເກດຄື ຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດທີ່ຄົ້ນພົບໃໝ່ນີ້ຍັງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງຢາສູບ ແລະ ຕັບ ແລະ ບໍ່ເປັນພິດຕໍ່ເຊື້ອແບັກທີເຣຍ ຫຼື ຈຸລັງ HeLa. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ອະນຸພັນກົດ urmotonic ບາງຊະນິດເຮັດໃຫ້ເກີດຮູບແບບຮາກທີ່ບິດເບືອນ, ຊຶ່ງໝາຍຄວາມວ່າອະນຸພັນເຫຼົ່ານີ້ມີຜົນກະທົບໂດຍກົງ ຫຼື ໂດຍທາງອ້ອມຕໍ່ microtubules. ສອດຄ່ອງກັບແນວຄວາມຄິດນີ້, ການສັງເກດການຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບ microtubules ທີ່ມີປ້າຍຊື່ທັງທາງ immunohistochemically ຫຼື ດ້ວຍໂປຣຕີນ fluorescent ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND ເຮັດໃຫ້ microtubules ເສື່ອມສະພາບ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍອະນຸພັນກົດ kumamotonic ໄດ້ລົບກວນ microfilaments actin. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດຊະນິດໃໝ່ທີ່ມີກົນໄກການອອກລິດທີ່ເປັນເອກະລັກສະເພາະທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການທຳລາຍໂຄງກະດູກຈຸລັງ.
ສາຍພັນ MK493-CF1 ໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກດິນໃນ Shinagawa-ku, ໂຕກຽວ. ສາຍພັນ MK493-CF1 ໄດ້ສ້າງເປັນເສັ້ນໄຍ stromal ທີ່ມີກິ່ງງ່າດີ. ລຳດັບບາງສ່ວນຂອງ gene RNA ribosomal 16S (1422 bp) ໄດ້ຖືກກຳນົດ. ສາຍພັນນີ້ຄ້າຍຄືກັນກັບ S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ສາຍພັນປົກກະຕິ, 99.93%). ອີງຕາມຜົນໄດ້ຮັບນີ້, ມັນໄດ້ຖືກກຳນົດວ່າສາຍພັນນີ້ມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບສາຍພັນປະເພດຂອງ S. werraensis. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາຈຶ່ງຕັ້ງຊື່ສາຍພັນນີ້ຊົ່ວຄາວວ່າ S. werraensis MK493-CF1. S. werraensis ISP 5486T ຍັງຜະລິດສານປະກອບຊີວະພາບດຽວກັນ. ເນື່ອງຈາກມີການຄົ້ນຄວ້າໃນໄລຍະຕົ້ນໆໜ້ອຍໃນການໄດ້ຮັບຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດຈາກຈຸລິນຊີນີ້, ການຄົ້ນຄວ້າທາງເຄມີຕື່ມອີກຈຶ່ງໄດ້ຖືກປະຕິບັດ. ຫຼັງຈາກການເພາະເລี้ยง S. werraensis MK493-CF1 ໃນອາຫານກາງເຂົ້າບາເລໂດຍການໝັກແຂງທີ່ອຸນຫະພູມ 30°C ເປັນເວລາ 14 ມື້, ອາຫານກາງໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍ EtOH 50%. ຕົວຢ່າງ 60 ມລ ໄດ້ຖືກຕາກແຫ້ງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສານສະກັດດິບ 59.5 ມກ. ສານສະກັດດິບໄດ້ຖືກນຳໄປຜ່ານ HPLC ໄລຍະປີ້ນກັບກັນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, ຊື່ວ່າ coumamonamide, 36.0 ມກ). ປະລິມານທັງໝົດຂອງ 1 ແມ່ນປະມານ 60% ຂອງສານສະກັດດິບ. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາຈຶ່ງຕັດສິນໃຈສຶກສາຄຸນສົມບັດຂອງ kumamotoamide 1 ໂດຍລະອຽດ.
Coumamonamide 1 ເປັນຜົງອະມໍຟັສສີຂາວ ແລະ ການວິເຄາະມວນສານທີ່ມີຄວາມລະອຽດສູງ (HRESIMS) ຢືນຢັນ C6H8N2O2 (ຮູບທີ 1). ຊິ້ນສ່ວນ pyrrole ທີ່ຖືກທົດແທນໂດຍ C2 ຂອງສານປະກອບນີ້ມີລັກສະນະໂດຍ δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH ໃນສະເປກຕຣຳ 1H NMR: 4.5 Hz, H-5) ແລະ δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), ແລະ ສະເປກຕຣຳ 13C NMR ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການມີຢູ່ຂອງອະຕອມຄາບອນ sp2 ສີ່ອະຕອມ. ການມີຢູ່ຂອງກຸ່ມອະໄມດ໌ຢູ່ທີ່ຕຳແໜ່ງ C2 ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍສະຫະສຳພັນ HMBC ຈາກໂປຣຕອນ C-3 ໄປຫາຄາບອນອະໄມດ໌ຄາບອນນິລທີ່ δC 161.1. ນອກຈາກນັ້ນ, ຈຸດສູງສຸດຂອງ 1 H ແລະ 13 C NMR ທີ່ δH 4.10 (3H, S) ແລະ δC 68.3 ຊີ້ບອກເຖິງການມີຢູ່ຂອງກຸ່ມ N-methoxy ໃນໂມເລກຸນ. ເຖິງແມ່ນວ່າຕຳແໜ່ງທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງກຸ່ມ methoxy ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ຖືກກຳນົດໂດຍໃຊ້ການວິເຄາະທາງສະເປກໂຕຣສະໂກປີ ເຊັ່ນ: ການວິເຄາະຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ ແລະ ຕົວຫຍໍ້ຂອງ nuclear Overhauser (NOEDF), N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide ໄດ້ກາຍເປັນສານປະກອບທຳອິດ.
ເພື່ອກຳນົດໂຄງສ້າງທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ 1, ການສັງເຄາະທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດ (ຮູບທີ 2a). ການປະຕິບັດ 2-aminopyridine 2 ທີ່ມີຢູ່ໃນທ້ອງຕະຫຼາດດ້ວຍ m-CPBA ເຮັດໃຫ້ໄດ້ N-oxide 3 ທີ່ສອດຄ້ອງກັນໃນຜົນຜະລິດດ້ານປະລິມານ. ຫຼັງຈາກ 2-aminoazidation ຂອງ 2, ປະຕິກິລິຍາ cyclocondensation ທີ່ອະທິບາຍໂດຍ Abramovich ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ benzene ທີ່ 90°C ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 1-hydroxy-1H-pyrrole-2-carbonitrile 5 ທີ່ຕ້ອງການໃນກຼາມ. ຄວາມໄວ 60% (ສອງຂັ້ນຕອນ). 15,16. ການເມທິເລຊັນ ແລະ ການໄຮໂດຼໄລຊິດຂອງ 4 ຫຼັງຈາກນັ້ນໃຫ້ 1-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxylic acid (ເອີ້ນວ່າ "cumotonic acid", 6) ໃນຜົນຜະລິດທີ່ດີ (70%, ສອງຂັ້ນຕອນ). ສຸດທ້າຍ, ການປະສົມ amide ຜ່ານ acid chloride intermediate 6 ໂດຍໃຊ້ ammonia ທີ່ເປັນນ້ຳໃຫ້ Kumamoto amide 1 ໃນຜົນຜະລິດ 98%. ຂໍ້ມູນ spectral ທັງໝົດຂອງ synthesized 1 ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບ isolated 1, ສະນັ້ນໂຄງສ້າງຂອງ 1 ຈຶ່ງຖືກກໍານົດ;
ການສັງເຄາະທົ່ວໄປ ແລະ ການວິເຄາະກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບຂອງ urbenamide ແລະ ກົດ urbenic. (ກ) ການສັງເຄາະທັງໝົດຂອງ Kumamoto amide. (ຂ) ເບ້ຍ Arabidopsis Columbia (Col) ປະເພດທຳມະຊາດອາຍຸເຈັດວັນໄດ້ຖືກປູກໃນແຜ່ນ Murashige ແລະ Skoog (MS) ທີ່ມີ coumamonamide 6 ຫຼື coumamonamide 1 ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້. ແຖບມາດຕາສ່ວນ = 1 ຊມ.
ກ່ອນອື່ນໝົດ, ພວກເຮົາໄດ້ປະເມີນກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບຂອງ urbenamide ແລະຕົວກາງຂອງມັນ ສຳລັບຄວາມສາມາດໃນການປັບການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດ. ພວກເຮົາໄດ້ເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆຂອງ ursmonamide 1 ຫຼື ursmonic acid 6 ໃສ່ໃນຕົວກາງ MS agar ແລະ ປູກເບ້ຍ Arabidopsis thaliana ໃສ່ໃນຕົວກາງນີ້. ການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ (500 μM) ຂອງ 6 ຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງຮາກ (ຮູບທີ 2b). ຕໍ່ໄປ, ພວກເຮົາໄດ້ສ້າງອະນຸພັນຕ່າງໆໂດຍການແທນຕຳແໜ່ງ N1 ຂອງ 6 ແລະ ດຳເນີນການສຶກສາຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງໂຄງສ້າງ ແລະ ກິດຈະກຳກ່ຽວກັບພວກມັນ (ຂະບວນການສັງເຄາະແບບອະນາລັອກໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ໃນຂໍ້ມູນເສີມ (SI)). ເບ້ຍ Arabidopsis ໄດ້ຖືກປູກໃນຕົວກາງທີ່ມີອະນຸພັນກົດ ursonic 50 μM, ແລະ ຄວາມຍາວຂອງຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກ. ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ. ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3a, b, ແລະ S1, ກົດ coumamo ມີຄວາມຍາວທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຕ່ອງໂສ້ alkoxy ເສັ້ນຊື່ (9, 10, 11, 12, ແລະ 13) ຫຼື ຕ່ອງໂສ້ alkoxy ຂະໜາດໃຫຍ່ (15, 16, ແລະ 17) ຢູ່ຕຳແໜ່ງ N1. ອະນຸພັນສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງຮາກຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາຍັງພົບວ່າການໃຊ້ 200 μM 10, 11, ຫຼື 17 ຍັບຍັ້ງການແຕກງອກ (ຮູບທີ 3c ແລະ S2).
ການສຶກສາກ່ຽວກັບຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງໂຄງສ້າງ ແລະ ກິດຈະກຳຂອງ Kumamoto amide ແລະ ສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ. (ກ) ໂຄງສ້າງ ແລະ ໂຄງຮ່າງການສັງເຄາະຂອງສານທີ່ຄ້າຍຄືກັນ. (ຂ) ການວັດປະລິມານຄວາມຍາວຂອງຮາກຂອງເບ້ຍໄມ້ອາຍຸ 7 ມື້ທີ່ປູກໃນອາຫານກາງ MS ທີ່ມີ ຫຼື ບໍ່ມີອະນຸພັນ coumamonamide 50 μM. ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນກັບການປິ່ນປົວດ້ວຍການຫຼອກລວງ (ການທົດສອບ t, p< 0.05). n>18. ຂໍ້ມູນສະແດງເປັນຄ່າສະເລ່ຍ ± SD. nt ໝາຍຄວາມວ່າ "ບໍ່ໄດ້ທົດສອບ" ເພາະວ່າຫຼາຍກວ່າ 50% ຂອງເມັດບໍ່ແຕກງອກ. (c) ການວັດແທກອັດຕາການແຕກງອກຂອງເມັດທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວທີ່ບົ່ມເປັນເວລາ 7 ມື້ໃນສື່ກາງ MS ທີ່ມີ ຫຼື ບໍ່ມີ coumamonamide 200 μM ແລະສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ. ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນກັບການປິ່ນປົວແບບຫຼອກລວງ (ການທົດສອບ chi-square). n=96.
ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນການເພີ່ມຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຂອງ alkyl ທີ່ຍາວກວ່າ C9 ຫຼຸດຜ່ອນກິດຈະກຳຍັບຍັ້ງ, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບກົດ kumamotoic ຕ້ອງການຕ່ອງໂສ້ຂ້າງຂອງຂະໜາດທີ່ແນ່ນອນເພື່ອສະແດງກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບຂອງມັນ.
ເນື່ອງຈາກການວິເຄາະຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງໂຄງສ້າງ ແລະ ກິດຈະກຳສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ C9 ໄດ້ຖືກດັດແປງເປັນກົດ ursonic ແລະ ອະນຸພັນ nonyloxy ຂອງກົດ ursonic (ຕໍ່ໄປນີ້ເອີ້ນວ່າ KAND 11) ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາໄດ້ດຳເນີນການອະທິບາຍລັກສະນະລະອຽດຂອງ KAND 11. ການປິ່ນປົວດ້ວຍ Arabidopsis ດ້ວຍ KAND 11 50 μM ເກືອບຈະປ້ອງກັນການແຕກງອກໄດ້ຢ່າງສົມບູນ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່ຳ (40, 30, 20, ຫຼື 10 μM) ຂອງ KAND 11 ຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງຮາກໃນລັກສະນະທີ່ຂຶ້ນກັບປະລິມານ (ຮູບທີ 4a, b). ເພື່ອທົດສອບວ່າ KAND 11 ມີຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຢູ່ລອດຂອງເນື້ອເຍື່ອຮາກຫຼືບໍ່, ພວກເຮົາໄດ້ກວດສອບເນື້ອເຍື່ອຮາກທີ່ຍ້ອມດ້ວຍ propidium iodide (PI) ແລະ ວັດແທກຂະໜາດພື້ນທີ່ເນື້ອເຍື່ອ. ຂະໜາດຂອງ meristem ຂອງເບ້ຍໄມ້ທີ່ປູກໃນສື່ກາງທີ່ມີ KAND-11 25 μM ແມ່ນ 151.1 ± 32.5 μm, ໃນຂະນະທີ່ຂະໜາດຂອງ meristem ຂອງເບ້ຍໄມ້ທີ່ປູກໃນສື່ກາງຄວບຄຸມທີ່ມີ DMSO ແມ່ນ 264.7 ± 30.8 μm (ຮູບທີ 4c, d), ເຊິ່ງຊີ້ບອກວ່າ KAND-11 ຟື້ນຟູກິດຈະກຳຂອງເຊວ. ການແຜ່ກະຈາຍ. meristem ຮາກ. ສອດຄ່ອງກັບສິ່ງນີ້, ການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ໄດ້ຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານຂອງເຄື່ອງໝາຍການແບ່ງຈຸລັງ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ໃນ meristem ຮາກ (ຮູບທີ 4e) 17. ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ບອກວ່າ KAND 11 ຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງຮາກໂດຍການຫຼຸດຜ່ອນກິດຈະກຳການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊວ.
ການວິເຄາະຜົນກະທົບຂອງການຍັບຍັ້ງຂອງອະນຸພັນກົດ urbenonic (ອະນຸພັນ urbenyloxy) ຕໍ່ການຈະເລີນເຕີບໂຕ. (ກ) ເບ້ຍ Col ປະເພດທຳມະຊາດອາຍຸ 7 ມື້ທີ່ປູກໃນແຜ່ນ MS ດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້ຂອງ KAND 11. ແຖບມາດຕາສ່ວນ = 1 ຊມ. (ຂ) ການວັດແທກຄວາມຍາວຂອງຮາກ. ຕົວອັກສອນຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, ໜ້າ< 0.05). n>16. ຂໍ້ມູນສະແດງເປັນຄ່າສະເລ່ຍ ± SD. (c) ກ້ອງຈຸລະທັດ Confocal ຂອງຮາກ Col ແບບ wild-type ທີ່ມີສີ propidium iodide ຍ້ອມສີ ປູກຢູ່ໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີ ຫຼື ບໍ່ມີ 25 μM KAND 11. ວົງເລັບສີຂາວຊີ້ບອກເຖິງເນື້ອເຍື່ອຮາກ. ແຖບມາດຕາສ່ວນ = 100 µm. (d) ການວັດແທກຂະໜາດຂອງເນື້ອເຍື່ອຮາກ (n = 10 ຫາ 11). ຄວາມແຕກຕ່າງທາງສະຖິຕິໄດ້ຖືກກຳນົດໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ t (p< 0.05). ແຖບສະແດງເຖິງຂະໜາດຂອງ meristem ສະເລ່ຍ. (e) ກ້ອງຈຸລະທັດ Differential Interference Contrast (DIC) ຂອງ meristem ຮາກທີ່ມີໂຄງສ້າງ CDKB2; 1pro: CDKB2; 1-GUS ຖືກຍ້ອມສີ ແລະ ຍ້ອມສີໃສ່ເບ້ຍອາຍຸ 5 ມື້ທີ່ປູກໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີ ຫຼື ບໍ່ມີການທົດສອບ KAND 25 µM.
ຄວາມເປັນພິດຕໍ່ພືດຂອງ KAND 11 ໄດ້ຖືກທົດສອບຕື່ມອີກໂດຍໃຊ້ພືດສອງໃບອີກຊະນິດໜຶ່ງຄື ຢາສູບ (Nicotiana tabacum), ແລະ ສິ່ງມີຊີວິດຕົວແບບພືດທີ່ສຳຄັນຄື liverwort (Marchantia polymorpha). ເຊັ່ນດຽວກັນກັບກໍລະນີຂອງ Arabidopsis, ເບ້ຍຢາສູບ SR-1 ທີ່ປູກໃນສື່ທີ່ມີ KAND 11 25 μM ຜະລິດຮາກສັ້ນກວ່າ (ຮູບທີ 5a). ນອກຈາກນັ້ນ, 40 ໃນ 48 ເມັດໄດ້ງອກໃນແຜ່ນທີ່ມີ KAND 11 200 μM, ໃນຂະນະທີ່ເມັດທັງໝົດ 48 ເມັດໄດ້ງອກໃນສື່ທີ່ຖືກປະຕິບັດແບບຈຳລອງ, ຊີ້ບອກວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND ທີ່ສູງຂຶ້ນແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນ (p< 0.05; chi test -square) ຍັບຍັ້ງການແຕກງອກຂອງຢາສູບ. (ຮູບທີ 5b). ນອກຈາກນັ້ນ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND 11 ທີ່ຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣຍໃນ liverwort ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນ Arabidopsis (ຮູບທີ 5c). ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ KAND 11 ສາມາດຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງພືດຫຼາກຫຼາຍຊະນິດ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສືບສວນຄວາມເປັນພິດຂອງສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ monoamide ຂອງໝີໃນສິ່ງມີຊີວິດອື່ນໆ, ຄືຈຸລັງ HeLa ຂອງມະນຸດ ແລະ ເຊື້ອ Escherichia coli DH5α, ເປັນຕົວແທນຂອງຈຸລັງສັດ ແລະ ຈຸລັງເຊື້ອແບັກທີເຣຍທີ່ສູງກວ່າ, ຕາມລໍາດັບ. ໃນຊຸດການທົດສອບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ, ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າ coumamonamide 1, coumamonamidic acid 6, ແລະ KAND 11 ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງຈຸລັງ HeLa ຫຼື E. coli ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 100 μM (ຮູບທີ 5d, e).
ການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງ KAND 11 ໃນສິ່ງມີຊີວິດທີ່ບໍ່ແມ່ນ Arabidopsis. (ກ) ເບ້ຍຢາສູບ SR-1 ປະເພດທຳມະຊາດອາຍຸສອງອາທິດໄດ້ຖືກປູກໃນແຜ່ນ MS ທີ່ວາງແນວຕັ້ງທີ່ມີ KAND 11 25 μM. (ຂ) ເບ້ຍຢາສູບ SR-1 ປະເພດທຳມະຊາດອາຍຸສອງອາທິດໄດ້ຖືກປູກໃນແຜ່ນ MS ທີ່ວາງແນວນອນທີ່ມີ KAND 11 200 μM. (ຄ) ຕາດອກຕັບໝູ Tak-1 ປະເພດທຳມະຊາດອາຍຸສອງອາທິດທີ່ປູກໃນແຜ່ນ Gamborgic B5 ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້ຂອງ KAND 11. ລູກສອນສີແດງຊີ້ບອກເຖິງສະປໍທີ່ຢຸດການເຕີບໂຕພາຍໃນໄລຍະເວລາຟັກຕົວສອງອາທິດ. (ງ) ການທົດສອບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງຂອງຈຸລັງ HeLa. ຈຳນວນຈຸລັງທີ່ມີຊີວິດໄດ້ຖືກວັດແທກໃນຊ່ວງເວລາທີ່ກຳນົດໂດຍໃຊ້ຊຸດນັບຈຸລັງ 8 (Dojindo). ໃນຖານະເປັນຕົວຄວບຄຸມ, ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ actinomycin D (Act D) 5 μg/ml, ເຊິ່ງຍັບຍັ້ງການຖອດລະຫັດ RNA polymerase ແລະເຮັດໃຫ້ຈຸລັງຕາຍ. ການວິເຄາະໄດ້ດຳເນີນການເປັນສາມເທົ່າ. (ຈ) ການທົດສອບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ E. coli. ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງເຊື້ອ E. coli ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວັດແທກ OD600. ໃນຖານະເປັນຕົວຄວບຄຸມ, ຈຸລັງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ ampicillin (Amp) 50 μg/ml, ເຊິ່ງຍັບຍັ້ງການສັງເຄາະຜະໜັງຈຸລັງຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣຍ. ການວິເຄາະໄດ້ປະຕິບັດເປັນສາມຄັ້ງ.
ເພື່ອຖອດລະຫັດກົນໄກການອອກລິດຂອງຄວາມເປັນພິດຕໍ່ຈຸລັງທີ່ເກີດຈາກສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ uramide, ພວກເຮົາໄດ້ວິເຄາະອະນຸພັນກົດ urbenic ຄືນໃໝ່ທີ່ມີຜົນກະທົບຍັບຍັ້ງປານກາງ. ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ. ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2b, 6a, ເບ້ຍໄມ້ທີ່ປູກໃນແຜ່ນ agar ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ (200 μM) ຂອງກົດ urmotonic 6 ໄດ້ຜະລິດຮາກທີ່ສັ້ນກວ່າ ແລະ ໂຄ້ງຊ້າຍ (θ = – 23.7 ± 6.1), ໃນຂະນະທີ່ເບ້ຍໄມ້ທີ່ປູກໃນສື່ຄວບຄຸມ, ເບ້ຍໄມ້ໄດ້ຜະລິດຮາກເກືອບຊື່ (θ = – 3.8 ± 7.1). ການເຕີບໂຕແບບອຽງນີ້ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າເປັນຜົນມາຈາກການເຮັດວຽກຜິດປົກກະຕິຂອງ microtubules cortical14,18. ສອດຄ່ອງກັບການຄົ້ນພົບນີ້, ຢາທີ່ເຮັດໃຫ້ microtubule ບໍ່ໝັ້ນຄົງ disopyramide ແລະ oryzalin ກະຕຸ້ນການອຽງຂອງຮາກທີ່ຄ້າຍຄືກັນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການເຕີບໂຕຂອງພວກເຮົາ (ຮູບທີ 2b, 6a). ໃນເວລາດຽວກັນ, ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບອະນຸພັນກົດ urmotonic ແລະ ເລືອກເອົາຫຼາຍໆຊະນິດທີ່, ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແນ່ນອນ, ກະຕຸ້ນການເຕີບໂຕຂອງຮາກແບບອຽງ. ສານປະກອບ 8, 9, ແລະ 15 ໄດ້ປ່ຽນທິດທາງການເຕີບໂຕຂອງຮາກທີ່ 75 μM, 50 μM, ແລະ 40 μM ຕາມລໍາດັບ, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າສານປະກອບເຫຼົ່ານີ້ສາມາດເຮັດໃຫ້ໄມໂຄຣທູບູນບໍ່ໝັ້ນຄົງໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ (ຮູບທີ 2b, 6a). ພວກເຮົາຍັງໄດ້ທົດສອບອະນຸພັນອາຊິດ ursolic ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງສຸດ, KAND 11, ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່ຳກວ່າ (15 µM) ແລະພົບວ່າການໃຊ້ KAND 11 ຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງຮາກ ແລະທິດທາງການເຕີບໂຕຂອງຮາກບໍ່ສະເໝີພາບ, ເຖິງແມ່ນວ່າພວກມັນມັກຈະອຽງໄປທາງຊ້າຍ (ຮູບ C3). ເນື່ອງຈາກວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງຢາທີ່ເຮັດໃຫ້ໄມໂຄຣທູບູນບໍ່ໝັ້ນຄົງບາງຄັ້ງຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງພືດແທນທີ່ຈະເຮັດໃຫ້ຮາກອຽງ, ຫຼັງຈາກນັ້ນພວກເຮົາໄດ້ປະເມີນຄວາມເປັນໄປໄດ້ທີ່ KAND 11 ມີຜົນກະທົບຕໍ່ໄມໂຄຣທູບູນໂດຍການສັງເກດໄມໂຄຣທູບູນໃນຈຸລັງຜິວໜັງຂອງຮາກ. ການວິເຄາະທາງພູມຕ້ານທານໂດຍໃຊ້ພູມຕ້ານທານຕ້ານ β-tubulin ໃນຈຸລັງຜິວໜັງຂອງຮາກເບ້ຍທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ 25 μM KAND 11 ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການຫາຍໄປຂອງ microtubules cortical ເກືອບທັງໝົດໃນຈຸລັງຜິວໜັງໃນເຂດຍືດຕົວ (ຮູບທີ 6b). ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າກົດ kumamotonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນເຮັດໜ້າທີ່ໂດຍກົງ ຫຼື ໂດຍທາງອ້ອມຕໍ່ microtubules ເພື່ອລົບກວນພວກມັນ ແລະ ສານປະກອບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງ microtubule ລຸ້ນໃໝ່.
ກົດ Ursonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນປ່ຽນແປງ microtubules cortical ໃນ Arabidopsis thaliana. (ກ) ມຸມອຽງຂອງຮາກທີ່ວັດແທກໃນເວລາທີ່ມີອະນຸພັນກົດ urmotonic ຕ່າງໆຢູ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ລະບຸໄວ້. ຜົນກະທົບຂອງສອງສານປະກອບທີ່ຮູ້ຈັກວ່າຍັບຍັ້ງ microtubules: disopyramide ແລະ oryzalin ກໍ່ໄດ້ຖືກວິເຄາະເຊັ່ນກັນ. ຮູບທີ່ໃສ່ເຂົ້າໄປສະແດງໃຫ້ເຫັນມາດຕະຖານທີ່ໃຊ້ເພື່ອວັດແທກມຸມການເຕີບໂຕຂອງຮາກ. ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນກັບການປິ່ນປົວດ້ວຍການຫຼອກລວງ (ການທົດສອບ t, p< 0.05). n>19. ແຖບຂະໜາດ = 1 ຊມ. (b) ທໍ່ນ້ອຍໆໃນເປືອກສະໝອງ (Cortical microtubules) ໃນຈຸລັງຜິວໜັງໃນເຂດຍືດຕົວ. ທໍ່ນ້ອຍໆໃນຮາກ Arabidopsis Col ແບບທຳມະຊາດທີ່ປູກຢູ່ໃນແຜ່ນ MS ທີ່ມີ ຫຼື ບໍ່ມີ 25 μM KAND 11 ໄດ້ຖືກເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍການຍ້ອມສີ immunohistochemical ໂດຍໃຊ້ພູມຕ້ານທານປະຖົມ β-tubulin ແລະ ພູມຕ້ານທານທຸຕິຍະພູມ Alexa Fluor-conjugated. ແຖບຂະໜາດ = 10 µm. (c) ໂຄງສ້າງ Mitotic ຂອງ microtubules ໃນ meristem ຮາກ. Microtubules ໄດ້ຖືກເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ການຍ້ອມສີ immunohistochemical. ໂຄງສ້າງ Mitotic, ລວມທັງເຂດ prophase, spindles, ແລະ phragmoplasts, ໄດ້ຖືກນັບຈາກຮູບພາບ confocal. ລູກສອນຊີ້ບອກໂຄງສ້າງ microtubule mitotic. ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນກັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ sham (t test, p< 0.05). n>9. ແຖບມາດຕາສ່ວນ = 50 µm.
ເຖິງແມ່ນວ່າ Ursa ມີຄວາມສາມາດໃນການລົບກວນການເຮັດວຽກຂອງ microtubule, ແຕ່ກົນໄກການເຮັດວຽກຂອງມັນຄາດວ່າຈະແຕກຕ່າງຈາກຕົວແທນ depolymerizing microtubule ທົ່ວໄປ. ຕົວຢ່າງ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງຕົວແທນ depolymerizing microtubule ເຊັ່ນ disopyramide ແລະ oryzalin ກະຕຸ້ນການຂະຫຍາຍຕົວແບບ anisotropic ຂອງຈຸລັງ epidermal, ໃນຂະນະທີ່ KAND 11 ບໍ່ມີ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການໃຊ້ຮ່ວມກັນຂອງ KAND 11 ແລະ disopyramide ເຮັດໃຫ້ເກີດການຕອບສະໜອງການເຕີບໂຕຂອງຮາກທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍ disopyramide ແລະການຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍ KAND 11 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ (ຮູບ S4). ພວກເຮົາຍັງໄດ້ວິເຄາະການຕອບສະໜອງຂອງ disopyramide 1-1 (phs1-1) mutant ທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ KAND 11. phs1-1 ມີການກາຍພັນຈຸດ tubulin kinase ທີ່ບໍ່ແມ່ນ canonical ແລະຜະລິດຮາກສັ້ນກວ່າເມື່ອໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ disopyramide9,20. ເບ້ຍອ່ອນທີ່ກາຍພັນ phs1-1 ທີ່ປູກໃນອາຫານ agar ທີ່ມີ KAND 11 ມີຮາກສັ້ນກວ່າຄ້າຍຄືກັບທີ່ປູກໃນ disopyramid (ຮູບ S5).
ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສັງເກດເຫັນໂຄງສ້າງ microtubule ຂອງໄມໂທຕິກ, ເຊັ່ນ: ເຂດໂປຣເຟສ, spindles, ແລະ phragmoplasts, ໃນ meristem ຮາກຂອງເບ້ຍທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11. ສອດຄ່ອງກັບການສັງເກດການສຳລັບ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS, ການຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຂອງຈຳນວນ microtubules ຂອງໄມໂທຕິກໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ (ຮູບທີ 6c).
ເພື່ອອະທິບາຍລັກສະນະຄວາມເປັນພິດຂອງຈຸລັງຂອງ KAND 11 ທີ່ຄວາມລະອຽດຂອງຈຸລັງຍ່ອຍ, ພວກເຮົາໄດ້ປິ່ນປົວຈຸລັງລະງັບຢາສູບ BY-2 ດ້ວຍ KAND 11 ແລະສັງເກດການຕອບສະໜອງຂອງພວກມັນ. ກ່ອນອື່ນໝົດພວກເຮົາໄດ້ເພີ່ມ KAND 11 ໃສ່ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ສະແດງອອກ TagRFP-TUA6, ເຊິ່ງຕິດສະຫຼາກ microtubules ທີ່ມີການເຍືອງແສງ, ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງ KAND 11 ຕໍ່ microtubules cortical. ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ microtubule cortical ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການວິເຄາະຮູບພາບ, ເຊິ່ງຄິດໄລ່ອັດຕາສ່ວນຂອງພິກເຊວ cytoskeletal ໃນບັນດາພິກເຊວ cytoplasmic. ຜົນການທົດສອບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND 11 ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ, ຄວາມໜາແໜ້ນຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເປັນ 0.94 ± 0.74% ຫຼື 0.23 ± 0.28%, ຕາມລຳດັບ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DMSO , ເທົ່າກັບ 1.61 ± 0.34% (ຮູບທີ 7a). ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບການສັງເກດໃນ Arabidopsis ວ່າການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ກະຕຸ້ນການ depolymerization ຂອງ microtubules cortical (ຮູບທີ 6b). ພວກເຮົາຍັງໄດ້ກວດສອບສາຍ BY-2 ດ້ວຍເສັ້ນໃຍ actin ທີ່ຕິດສະຫຼາກ GFP-ABD ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນດຽວກັນຂອງ KAND 11 ແລະສັງເກດເຫັນວ່າການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ໄດ້ລົບກວນເສັ້ນໃຍ actin. ການປິ່ນປົວດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND 11 ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງຫຼຸດຜ່ອນຄວາມໜາແໜ້ນຂອງເສັ້ນໃຍ actin ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເປັນ 1.20 ± 0.62% ຫຼື 0.61 ± 0.26% ຕາມລຳດັບ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນໃນຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DMSO ແມ່ນ 1.69 ± 0.51% (ຮູບທີ 2). ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ກົງກັນຂ້າມກັບຜົນກະທົບຂອງ propyzamide, ເຊິ່ງບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ເສັ້ນໃຍ actin, ແລະ latrunculin B, ຕົວ depolymerizer actin ທີ່ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules (SI ຮູບທີ S6). ນອກຈາກນັ້ນ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍ coumamonamide 1, coumamonamide acid 6, ຫຼື KAND 11 ບໍ່ໄດ້ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules ໃນຈຸລັງ HeLa (ຮູບ SI S7). ດັ່ງນັ້ນ, ກົນໄກການເຮັດວຽກຂອງ KAND 11 ເຊື່ອກັນວ່າແຕກຕ່າງຈາກຕົວທຳລາຍໂຄງກະດູກຈຸລັງທີ່ຮູ້ຈັກ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການສັງເກດດ້ວຍກ້ອງຈຸລະທັດຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ໄດ້ເປີດເຜີຍການເລີ່ມຕົ້ນຂອງການຕາຍຂອງຈຸລັງໃນລະຫວ່າງການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 ແລະສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສັດສ່ວນຂອງຈຸລັງທີ່ຕາຍແລ້ວທີ່ມີຮອຍດ່າງສີຟ້າຂອງ Evans ບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 30 ນາທີ, ໃນຂະນະທີ່ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍ 90 ນາທີດ້ວຍ 50 μM ຫຼື 100 μM KAND, ຈຳນວນຈຸລັງທີ່ຕາຍແລ້ວໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນເປັນ 43.7% ຫຼື 80.1%, ຕາມລຳດັບ (ຮູບທີ 7c). ເມື່ອພິຈາລະນາຮ່ວມກັນ, ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ບອກວ່າອະນຸພັນຂອງກົດ ursolic ໃໝ່ KAND 11 ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງໂຄງກະດູກຈຸລັງສະເພາະຂອງພືດທີ່ມີກົນໄກການເຮັດວຽກທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກມາກ່ອນ.
KAND ມີຜົນກະທົບຕໍ່ microtubules cortical, actin filaments, ແລະ ຄວາມຢູ່ລອດຂອງຈຸລັງ BY-2 ຢາສູບ. (ກ) ການເບິ່ງເຫັນ microtubules cortical ໃນຈຸລັງ BY-2 ໃນເວລາທີ່ມີ TagRFP-TUA6. ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal. ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ microtubule cortical ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຈາກ micrographs ຂອງຈຸລັງເອກະລາດ 25 ຈຸລັງ. ຕົວອັກສອນຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, p< 0.05). ແຖບມາດຕາສ່ວນ = 10 µm. (b) ເສັ້ນໃຍ actin cortical ໃນຈຸລັງ BY-2 ທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນເວລາທີ່ມີ GFP-ABD2. ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal. ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງເສັ້ນໃຍ actin cortical ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຈາກຮູບຖ່າຍຈຸລະພາກຂອງຈຸລັງເອກະລາດ 25 ຈຸລັງ. ຕົວອັກສອນຊີ້ບອກເຖິງຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນ (ການທົດສອບ Tukey HSD, p< 0.05). ແຖບຂະໜາດ = 10 µm. (c) ການສັງເກດຈຸລັງ BY-2 ທີ່ຕາຍແລ້ວໂດຍການຍ້ອມສີ Evans blue. ຈຸລັງ BY-2 ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND 11 (50 μM ຫຼື 100 μM) ຫຼື DMSO ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດສະຫວ່າງ. n=3. ແຖບຂະໜາດ = 100 µm.
ການຄົ້ນພົບ ແລະ ການນຳໃຊ້ຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດໃໝ່ໆໄດ້ນຳໄປສູ່ຄວາມກ້າວໜ້າທີ່ສຳຄັນໃນຫຼາຍໆດ້ານຂອງຊີວິດມະນຸດ, ລວມທັງຢາປົວພະຍາດ ແລະ ກະສິກຳ. ການຄົ້ນຄວ້າທາງປະຫວັດສາດໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສານປະກອບທີ່ເປັນປະໂຫຍດຈາກຊັບພະຍາກອນທຳມະຊາດ. ໂດຍສະເພາະ, actinomycetes ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າເປັນປະໂຫຍດເປັນຢາຕ້ານເຊື້ອແມ່ທ້ອງສຳລັບ nematodes ເນື່ອງຈາກຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດສານປະສົມຂັ້ນສອງຕ່າງໆເຊັ່ນ avermectin, ສານປະກອບຫຼັກຂອງ ivermectin ແລະ bleomycin ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ, ນຳໃຊ້ທາງການແພດເປັນຕົວແທນຕ້ານມະເຮັງ21,22. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ສານປະກອບຢາຂ້າຫຍ້າຫຼາກຫຼາຍຊະນິດໄດ້ຖືກຄົ້ນພົບຈາກ actinomycetes, ເຊິ່ງບາງຊະນິດໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃນການຄ້າແລ້ວ1,23. ດັ່ງນັ້ນ, ການວິເຄາະສານປະສົມ actinomycete ເພື່ອແຍກຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດທີ່ມີກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບທີ່ຕ້ອງການຖືວ່າເປັນຍຸດທະສາດທີ່ມີປະສິດທິພາບ. ໃນການສຶກສາຄັ້ງນີ້, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນພົບສານປະກອບໃໝ່, coumamonamide, ຈາກ S. werraensis ແລະ ສັງເຄາະມັນໄດ້ສຳເລັດ. ກົດ Ursonic ແມ່ນສານປະສົມສັງເຄາະຂອງ urbenamide ແລະອະນຸພັນຂອງມັນ. ມັນສາມາດເຮັດໃຫ້ຮາກງໍມີລັກສະນະ, ສະແດງກິດຈະກຳການຂ້າຫຍ້າໃນລະດັບປານກາງຫາແຮງ, ແລະ ທຳລາຍ microtubules ຂອງພືດໂດຍກົງ ຫຼື ໂດຍທາງອ້ອມ. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ກົນໄກການອອກລິດຂອງກົດ urmotonic ອາດແຕກຕ່າງຈາກຕົວຍັບຍັ້ງ microtubule ທີ່ມີຢູ່ແລ້ວ, ເນື່ອງຈາກ KAND 11 ຍັງລົບກວນເສັ້ນໃຍ actin ແລະເຮັດໃຫ້ເຊວຕາຍ, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນກົນໄກການຄວບຄຸມທີ່ກົດ urmotonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນມີອິດທິພົນຕໍ່ໂຄງສ້າງ cytoskeletal ຫຼາກຫຼາຍຊະນິດ.
ການວິເຄາະລາຍລະອຽດເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບກົດ urbenonic ຈະຊ່ວຍໃຫ້ເຂົ້າໃຈກົນໄກການອອກລິດຂອງກົດ urbenonic ໄດ້ດີຂຶ້ນ. ໂດຍສະເພາະ, ເປົ້າໝາຍຕໍ່ໄປແມ່ນເພື່ອປະເມີນຄວາມສາມາດຂອງກົດ ursonic ໃນການຜູກມັດກັບ microtubules ທີ່ຫຼຸດລົງເພື່ອກຳນົດວ່າກົດ ursonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນເຮັດໜ້າທີ່ໂດຍກົງກັບ microtubules ແລະ depolymerize ພວກມັນ, ຫຼືວ່າການອອກລິດຂອງພວກມັນເຮັດໃຫ້ microtubule ບໍ່ໝັ້ນຄົງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ໃນກໍລະນີທີ່ microtubules ບໍ່ແມ່ນເປົ້າໝາຍໂດຍກົງ, ການກຳນົດສະຖານທີ່ອອກລິດ ແລະເປົ້າໝາຍໂມເລກຸນຂອງກົດ ursonic ໃນຈຸລັງພືດຈະຊ່ວຍໃຫ້ເຂົ້າໃຈຄຸນສົມບັດຂອງສານປະກອບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ ແລະວິທີທີ່ເປັນໄປໄດ້ເພື່ອປັບປຸງກິດຈະກຳການຂ້າຫຍ້າ. ການທົດສອບກິດຈະກຳທາງຊີວະພາບຂອງພວກເຮົາໄດ້ເປີດເຜີຍຄວາມສາມາດທີ່ເປັນພິດຂອງ cytotoxic ຂອງກົດ ursonic ຕໍ່ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງພືດເຊັ່ນ Arabidopsis thaliana, ຢາສູບ ແລະ liverwort, ໃນຂະນະທີ່ທັງ E. coli ແລະຈຸລັງ HeLa ບໍ່ໄດ້ຮັບຜົນກະທົບ. ຄວາມເປັນພິດໜ້ອຍ ຫຼືບໍ່ມີເລີຍຕໍ່ຈຸລັງສັດແມ່ນຂໍ້ໄດ້ປຽບຂອງອະນຸພັນກົດ ursonic ຖ້າພວກມັນຖືກພັດທະນາເປັນຢາຂ້າຫຍ້າສຳລັບການນຳໃຊ້ໃນຂົງເຂດກະສິກຳເປີດ. ແທ້ຈິງແລ້ວ, ເນື່ອງຈາກ microtubules ເປັນໂຄງສ້າງທົ່ວໄປໃນ eukaryotes, ການຍັບຍັ້ງການເລືອກເຟັ້ນຂອງພວກມັນໃນພືດແມ່ນຄວາມຕ້ອງການທີ່ສຳຄັນສຳລັບຢາຂ້າຫຍ້າ. ຕົວຢ່າງ, propyzamide, ຕົວແທນ depolymerizing microtubule ທີ່ຜູກມັດໂດຍກົງກັບ tubulin ແລະຍັບຍັ້ງການ polymerization, ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຢາຂ້າຫຍ້າເນື່ອງຈາກຄວາມເປັນພິດຕໍ່າຕໍ່ຈຸລັງສັດ24. ກົງກັນຂ້າມກັບ disopyramide, benzamides ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງມີຄວາມຈໍາເພາະເປົ້າຫມາຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ນອກເໜືອໄປຈາກ microtubules ຂອງພືດ, RH-4032 ຫຼື benzoxamide ຍັງຍັບຍັ້ງ microtubules ຂອງຈຸລັງສັດຫຼື oomycetes ຕາມລໍາດັບ, ແລະ zalilamide ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຢາຂ້າເຊື້ອລາເນື່ອງຈາກຄວາມເປັນພິດຂອງພືດຕ່ໍາ25,26,27. ໝີທີ່ຄົ້ນພົບໃຫມ່ແລະອະນຸພັນຂອງມັນສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມເປັນພິດຕໍ່ພືດທີ່ເລືອກຕໍ່ພືດ, ແຕ່ມັນຄວນຈະສັງເກດວ່າການດັດແປງຕື່ມອີກອາດຈະປ່ຽນແປງຄວາມຈໍາເພາະເປົ້າຫມາຍຂອງມັນ, ອາດຈະໃຫ້ອະນຸພັນເພີ່ມເຕີມສໍາລັບການຄວບຄຸມເຊື້ອລາທີ່ເປັນພະຍາດຫຼື oomycetes.
ຄຸນສົມບັດທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງກົດ urbenonic ແລະອະນຸພັນຂອງມັນແມ່ນເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການພັດທະນາຂອງພວກມັນເປັນຢາຂ້າຫຍ້າ ແລະ ການນໍາໃຊ້ເປັນເຄື່ອງມືການຄົ້ນຄວ້າ. ຄວາມສໍາຄັນຂອງ cytoskeleton ໃນການຄວບຄຸມຮູບຮ່າງຂອງເຊວພືດແມ່ນໄດ້ຮັບການຍອມຮັບຢ່າງກວ້າງຂວາງ. ການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພືດໄດ້ພັດທະນາກົນໄກທີ່ສັບສົນຂອງການຈັດຕັ້ງ microtubule cortical ໂດຍການຄວບຄຸມການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ເພື່ອຄວບຄຸມ morphogenesis ຢ່າງຖືກຕ້ອງ. ຈໍານວນໂມເລກຸນຈໍານວນຫຼວງຫຼາຍທີ່ຮັບຜິດຊອບໃນການຄວບຄຸມກິດຈະກໍາຂອງ microtubule ໄດ້ຖືກລະບຸ, ແລະ ການຄົ້ນຄວ້າທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຍັງດໍາເນີນຢູ່3,4,28. ຄວາມເຂົ້າໃຈໃນປະຈຸບັນຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ໃນເຊວພືດບໍ່ໄດ້ອະທິບາຍຢ່າງເຕັມສ່ວນກ່ຽວກັບກົນໄກຂອງການຈັດຕັ້ງ microtubule cortical. ຕົວຢ່າງ, ເຖິງແມ່ນວ່າທັງ disopyramide ແລະ oryzalin ສາມາດ depolymerize microtubules, disopyramide ເຮັດໃຫ້ເກີດການບິດເບືອນຮາກຢ່າງຮຸນແຮງ ໃນຂະນະທີ່ oryzalin ມີຜົນກະທົບທີ່ຂ້ອນຂ້າງອ່ອນໂຍນ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການກາຍພັນໃນ tubulin, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ microtubules ໝັ້ນຄົງ, ຍັງເຮັດໃຫ້ເກີດ dextrorotation ໃນຮາກ, ໃນຂະນະທີ່ paclitaxel, ເຊິ່ງຍັງເຮັດໃຫ້ການເຄື່ອນໄຫວຂອງ microtubule ໝັ້ນຄົງ, ບໍ່ໄດ້. ດັ່ງນັ້ນ, ການສຶກສາ ແລະ ການກຳນົດເປົ້າໝາຍທາງໂມເລກຸນຂອງກົດ ursolic ຄວນໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈໃໝ່ກ່ຽວກັບການຄວບຄຸມຂອງ microtubules cortical ຂອງພືດ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການປຽບທຽບໃນອະນາຄົດຂອງສານເຄມີທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນການສົ່ງເສີມການເຕີບໂຕທີ່ບິດເບືອນ, ເຊັ່ນ disopyramide, ແລະ ສານເຄມີທີ່ມີປະສິດທິພາບໜ້ອຍກວ່າ, ເຊັ່ນ oryzalin ຫຼື kumamotoric acid, ຈະໃຫ້ຂໍ້ຄຶດກ່ຽວກັບວິທີການທີ່ການເຕີບໂຕທີ່ບິດເບືອນເກີດຂຶ້ນ.
ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການຈັດລຽງໂຄງສ້າງຂອງຈຸລັງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການປ້ອງກັນແມ່ນອີກຄວາມເປັນໄປໄດ້ໜຶ່ງທີ່ຈະອະທິບາຍເຖິງຄວາມເປັນພິດຂອງຈຸລັງຂອງກົດ ursonic. ການຕິດເຊື້ອຂອງເຊື້ອພະຍາດ ຫຼື ການນຳເອົາຕົວກະຕຸ້ນເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງພືດບາງຄັ້ງກໍ່ເຮັດໃຫ້ຈຸລັງຈຸລັງຖືກທຳລາຍ ແລະ ຈຸລັງຕາຍຕໍ່ມາ29. ຕົວຢ່າງ, cryptoxanthin ທີ່ມາຈາກ oomycete ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າລົບກວນ microtubules ແລະ actin filaments ກ່ອນການຕາຍຂອງຈຸລັງຢາສູບ, ຄ້າຍຄືກັບສິ່ງທີ່ເກີດຂຶ້ນກັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ KAND30,31. ຄວາມຄ້າຍຄືກັນລະຫວ່າງການຕອບສະໜອງຂອງການປ້ອງກັນ ແລະ ການຕອບສະໜອງຂອງຈຸລັງທີ່ເກີດຈາກກົດ ursonic ເຮັດໃຫ້ພວກເຮົາສົມມຸດຕິຖານວ່າພວກມັນກະຕຸ້ນຂະບວນການຂອງຈຸລັງທົ່ວໄປ, ເຖິງແມ່ນວ່າຜົນກະທົບທີ່ໄວ ແລະ ແຂງແຮງກວ່າຂອງກົດ ursonic ກ່ວາ cryptoxanthin ແມ່ນເຫັນໄດ້ຊັດເຈນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການລົບກວນຂອງ actin filaments ສົ່ງເສີມການຕາຍຂອງຈຸລັງທີ່ເກີດຂຶ້ນເອງ, ເຊິ່ງບໍ່ໄດ້ມາພ້ອມກັບການລົບກວນຂອງ microtubule ສະເໝີໄປ29. ນອກຈາກນັ້ນ, ມັນຍັງຕ້ອງໄດ້ເຫັນວ່າເຊື້ອພະຍາດ ຫຼື ຕົວກະຕຸ້ນເຮັດໃຫ້ເກີດການເຕີບໂຕຂອງຮາກທີ່ບິດເບືອນ, ຄືກັບອະນຸພັນຂອງກົດ ursonic. ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມຮູ້ດ້ານໂມເລກຸນທີ່ເຊື່ອມໂຍງການຕອບສະໜອງຂອງການປ້ອງກັນ ແລະ ຈຸລັງຈຸລັງແມ່ນບັນຫາທີ່ໜ້າສົນໃຈທີ່ຕ້ອງໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂ. ໂດຍການນຳໃຊ້ປະໂຫຍດຈາກການມີສານປະກອບທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕ່ຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບກົດ ursonic, ພ້ອມທັງອະນຸພັນຕ່າງໆທີ່ມີຄວາມແຮງແຕກຕ່າງກັນ, ພວກມັນອາດຈະສະໜອງໂອກາດທີ່ຈະແນໃສ່ກົນໄກຂອງຈຸລັງທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ.
ເມື່ອພິຈາລະນາຮ່ວມກັນ, ການຄົ້ນພົບ ແລະ ການນຳໃຊ້ສານປະກອບໃໝ່ທີ່ປັບປ່ຽນການເຄື່ອນໄຫວຂອງໄມໂຄຣທູບູລ ຈະສະໜອງວິທີການທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນການແກ້ໄຂກົນໄກໂມເລກຸນທີ່ສັບສົນທີ່ຢູ່ເບື້ອງຫຼັງການກຳນົດຮູບຮ່າງຂອງເຊວພືດ. ໃນສະພາບການນີ້, ສານປະກອບອາຊິດ urmotonic ທີ່ພັດທະນາຂຶ້ນໃໝ່ ເຊິ່ງມີຜົນກະທົບຕໍ່ໄມໂຄຣທູບູລ ແລະ ເສັ້ນໃຍ actin ແລະ ກະຕຸ້ນການຕາຍຂອງເຊວ ອາດເປັນໂອກາດທີ່ຈະຖອດລະຫັດການເຊື່ອມຕໍ່ລະຫວ່າງການຄວບຄຸມໄມໂຄຣທູບູລ ແລະ ກົນໄກອື່ນໆເຫຼົ່ານີ້. ດັ່ງນັ້ນ, ການວິເຄາະທາງເຄມີ ແລະ ຊີວະວິທະຍາໂດຍໃຊ້ອາຊິດ urbenonic ຈະຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາເຂົ້າໃຈກົນໄກການຄວບຄຸມໂມເລກຸນທີ່ຄວບຄຸມໂຄງກະດູກຂອງເຊວພືດ.
ສັກເຊື້ອ S. werraensis MK493-CF1 ລົງໃນຂວດ Erlenmeyer ຂະໜາດ 500 ມລ ທີ່ບັນຈຸເມັດພັນ 110 ມລ ປະກອບດ້ວຍ galactose 2% (w/v), essence paste 2% (w/v), ສ່ວນປະກອບ Bacto 1% (w/v). -soyton (Thermo Fisher Scientific, Inc.), ສານສະກັດຈາກສາລີ 0.5% (w/v) (KOGOSTCH Co., Ltd., ຍີ່ປຸ່ນ), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 ແລະ 0.2% CaCO3 ໃນນ້ຳທີ່ບໍ່ມີໄອອອນ. (pH 7.4 ກ່ອນການຂ້າເຊື້ອ). ເຊື້ອເມັດພັນໄດ້ຖືກບົ່ມໃສ່ເຄື່ອງສັ່ນແບບໝຸນ (180 rpm) ທີ່ອຸນຫະພູມ 27°C ເປັນເວລາ 2 ມື້. ການປູກຝັງການຜະລິດໂດຍການໝັກແບບແຂງ. ແກ່ນພັນ (7 ມລ) ໄດ້ຖືກຍ້າຍເຂົ້າໄປໃນຂວດ K-1 ຂະໜາດ 500 ມລ ເຊິ່ງປະກອບດ້ວຍສື່ກາງການຜະລິດ 40 ກຣາມ ປະກອບດ້ວຍເຂົ້າບາເລທີ່ບີບອັດ 15 ກຣາມ (ບໍລິສັດ MUSO ຈຳກັດ, ຍີ່ປຸ່ນ) ແລະ ນ້ຳທີ່ບໍ່ມີໄອອອນ 25 ກຣາມ (pH ບໍ່ໄດ້ປັບກ່ອນການຂ້າເຊື້ອ). ການໝັກໄດ້ດຳເນີນຢູ່ທີ່ 30°C ໃນຄວາມມືດເປັນເວລາ 14 ມື້. ວັດສະດຸໝັກໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍ EtOH 40 ມລ/ຂວດ ແລະ ປั่นແຍກ (1500 ກຣາມ, 4°C, 10 ນາທີ). ນ້ຳເຊວລ້າງເຊື້ອ (60 ມລ) ໄດ້ຖືກສະກັດດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງ 10% MeOH/EtOAc. ຊັ້ນອິນຊີໄດ້ຖືກລະເຫີຍພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນທີ່ຫຼຸດລົງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສານຕົກຄ້າງ (59.5 ມກ), ເຊິ່ງໄດ້ຖືກນຳໄປໃຊ້ HPLC ດ້ວຍການລະລາຍແບບ gradient (0–10 ນາທີ: 90%) ໃນຖັນໄລຍະປີ້ນກັບກັນ (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID 10 ມມ × ຄວາມຍາວ 250 ມມ) H2O/CH3CN, 10–35 ນາທີ: 90% H2O/CH3CN ເຖິງ 70% H2O/CH3CN (ແບບ gradient), 35–45 ນາທີ: 90% H2O/EtOH, 45–155 ນາທີ: 90% H2O/EtOH ເຖິງ 100% EtOH (ແບບ gradient (ແບບ gradient), 155–200 ນາທີ: 100% EtOH) ໃນອັດຕາການໄຫຼ 1.5 ມລ/ນາທີ, coumamonamide (1, 36.0 ມກ) ໄດ້ຖືກແຍກອອກເປັນຜົງອະມໍຟັສສີຂາວ.
Kumamotoamide(1); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H). ), 4.08 (s, 3H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3; ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ຄ່າທີ່ຄິດໄລ່ໄດ້: 141.0659, ຄ່າທີ່ວັດແທກໄດ້: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 1593, 1537 cm–1.
ເມັດພັນ Columbia (Col-0) ໄດ້ຮັບຈາກສູນຊັບພະຍາກອນຊີວະພາບ Arabidopsis (ABRC) ໂດຍໄດ້ຮັບອະນຸຍາດສຳລັບການນຳໃຊ້ໃນການຄົ້ນຄວ້າ. ເມັດພັນ Col-0 ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍພັນ ແລະ ຮັກສາໄວ້ພາຍໃຕ້ສະພາບຫ້ອງທົດລອງຂອງພວກເຮົາ ແລະ ນຳໃຊ້ເປັນພືດ Arabidopsis ແບບທຳມະຊາດ. ເມັດພັນ Arabidopsis ໄດ້ຖືກຂ້າເຊື້ອພື້ນຜິວ ແລະ เพาะเลี้ยงໃນອາຫານ Murashige ແລະ Skoog ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນເຄິ່ງໜຶ່ງທີ່ມີນ້ຳຕານຊູໂຄຣສ 2% (Fujifilm Wako Pure Chemical), 0.05% (w/v) 2-(4-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) (Fujifilm Wako Pure Chemical) ແລະ 1.5% agar (Fujifilm Wako Pure Chemical), pH 5.7, ທີ່ອຸນຫະພູມ 23°C ແລະ ແສງສະຫວ່າງຄົງທີ່. ເມັດພັນຂອງເຊື້ອ phs1-1 ໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ໂດຍ T. Hashimoto (ສະຖາບັນວິທະຍາສາດ ແລະ ເຕັກໂນໂລຊີ Nara).
ແກ່ນຂອງເຊື້ອ SR-1 ໄດ້ຮັບການສະໜອງໃຫ້ໂດຍ T. Hashimoto (ສະຖາບັນວິທະຍາສາດ ແລະ ເຕັກໂນໂລຊີ Nara) ແລະ ນຳໃຊ້ເປັນຕົ້ນຢາສູບທຳມະຊາດ. ແກ່ນຢາສູບໄດ້ຖືກຂ້າເຊື້ອໜ້າດິນ ແລະ ແຊ່ນ້ຳທີ່ຂ້າເຊື້ອເປັນເວລາສາມຄືນເພື່ອສົ່ງເສີມການແຕກງອກ, ຈາກນັ້ນວາງໄວ້ໃນສານລະລາຍເຄິ່ງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ມີນ້ຳຕານຊູໂຄຣສ 2%, MES 0.05% (w/v), ແລະ ຢາງເຈວ 0.8% (Fujifilm Wako Pure Chemical) Murashige. ແລະ Skoog medium) ທີ່ມີ pH 5.7 ແລະ ບົ່ມໄວ້ທີ່ອຸນຫະພູມ 23°C ພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງທີ່ຄົງທີ່.
ສາຍພັນ Tak-1 ໄດ້ຮັບຈາກ T. Kohchi (ມະຫາວິທະຍາໄລ Kyoto) ແລະ ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຫົວໜ່ວຍທົດລອງມາດຕະຖານສໍາລັບການສຶກສາ liverwort. Gemma ໄດ້ມາຈາກພືດທີ່ປູກແລ້ວ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ເຄືອບດ້ວຍສານອາຫານ Gamborf B5 (Fujifilm Wako Pure Chemical) ທີ່ມີນໍ້າຕານຊູໂຄຣສ 1% ແລະ ເຈວແລນ 0.3% ແລະ ບົ່ມໄວ້ທີ່ອຸນຫະພູມ 23°C ພາຍໃຕ້ແສງສະຫວ່າງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ.
ຈຸລັງຢາສູບ BY-2 (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) ໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ໂດຍ S. Hasezawa (ມະຫາວິທະຍາໄລໂຕກຽວ). ຈຸລັງ BY-2 ໄດ້ຖືກເຈືອຈາງ 95 ເທົ່າໃນອາຫານ Linsmeier ແລະ Skoog ທີ່ຖືກດັດແປງ ແລະ ເສີມດ້ວຍກົດ 2,4-dichlorophenoxyacetic 32 ທຸກໆອາທິດ. ສານລະລາຍຈຸລັງໄດ້ຖືກປະສົມໃສ່ເຄື່ອງສັ່ນແບບໝູນວຽນທີ່ 130 rpm ທີ່ 27°C ໃນຄວາມມືດ. ລ້າງຈຸລັງດ້ວຍອາຫານສົດທີ່ມີປະລິມານຫຼາຍກວ່າ 10 ເທົ່າ ແລະ ລະລາຍຄືນໃໝ່ໃນອາຫານດຽວກັນ. ສາຍຈຸລັງດັດແປງພັນທຸກໍາ BY-2 ທີ່ສະແດງອອກຢ່າງໝັ້ນຄົງເຖິງເຄື່ອງໝາຍ microtubule TagRFP-TUA6 ຫຼື ເຄື່ອງໝາຍ actin filament GFP-ABD2 ພາຍໃຕ້ໂປຣໂມເຕີ cauliflower mosaic virus 35S ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ 33,34,35. ສາຍຈຸລັງເຫຼົ່ານີ້ສາມາດຮັກສາ ແລະ ປະສານກັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ຂັ້ນຕອນທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບຂັ້ນຕອນທີ່ໃຊ້ສຳລັບສາຍຈຸລັງ BY-2 ຕົ້ນສະບັບ.
ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກเพาะเลี้ยงໃນອາຫານກາງ Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) (Life Technologies) ທີ່ເສີມດ້ວຍ serum ງົວໃນທ້ອງ 10%, penicillin 1.2 U/ml, ແລະ streptomycin 1.2 μg/ml ໃນຕູ້ອົບທີ່ມີອຸນຫະພູມ 37°C ທີ່ມີ CO2 5%.
ການທົດລອງທັງໝົດທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນເອກະສານສະບັບນີ້ແມ່ນປະຕິບັດຕາມລະບຽບການ ແລະ ແນວທາງຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບຂອງຍີ່ປຸ່ນ.
ສານປະກອບໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ dimethyl sulfoxide (DMSO; Fujifilm Wako Pure Chemical) ເປັນສານລະລາຍສະຕັອກ ແລະ ເຈືອຈາງໃນສື່ກາງ MS ສຳລັບ Arabidopsis ແລະ ຢາສູບ ຫຼື ສື່ກາງ Gambog B5 ສຳລັບ liverwort. ສຳລັບການທົດສອບການຍັບຍັ້ງການເຕີບໂຕຂອງຮາກ, ຫຼາຍກວ່າ 10 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນໄດ້ຖືກຫວ່ານໃສ່ສື່ກາງ agar ທີ່ມີສານປະກອບທີ່ລະບຸໄວ້ ຫຼື DMSO. ເມັດໄດ້ຖືກບົ່ມໃນຫ້ອງເຕີບໂຕເປັນເວລາ 7 ມື້. ເບ້ຍໄດ້ຖືກຖ່າຍຮູບ ແລະ ຄວາມຍາວຂອງຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກ. ສຳລັບການທົດສອບການແຕກງອກຂອງ Arabidopsis, 48 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນໄດ້ຖືກຫວ່ານໃສ່ສື່ກາງ agar ທີ່ມີສານປະກອບ 200 μM ຫຼື DMSO. ເມັດ Arabidopsis ໄດ້ຖືກປູກໃນຫ້ອງເຕີບໂຕ ແລະ ຈຳນວນເບ້ຍທີ່ແຕກງອກໄດ້ຖືກນັບ 7 ມື້ຫຼັງຈາກການແຕກງອກ (dag). ສຳລັບການທົດສອບການແຕກງອກຂອງຢາສູບ, 24 ເມັດຕໍ່ແຜ່ນໄດ້ຖືກຫວ່ານໃສ່ສື່ກາງ agar ທີ່ມີ KAND ຫຼື DMSO 200 μM. ເມັດຢາສູບໄດ້ຖືກປູກໃນຫ້ອງເຕີບໂຕ ແລະ ຈຳນວນເບ້ຍທີ່ແຕກງອກໄດ້ຖືກນັບຫຼັງຈາກ 14 ມື້. ສຳລັບການທົດສອບການຍັບຍັ້ງການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງ liverwort, ຕົວອ່ອນ 9 ໂຕຈາກແຕ່ລະແຜ່ນໄດ້ຖືກວາງໃສ່ອາຫານວ່າງທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ KAND ຫຼື DMSO ທີ່ລະບຸໄວ້ ແລະ ບົ່ມໄວ້ໃນຫ້ອງເຕີບໂຕເປັນເວລາ 14 ມື້.
ໃຊ້ເບ້ຍໄມ້ທີ່ຍ້ອມສີດ້ວຍ propidium iodide (PI) 5 ມກ/ມລ ເພື່ອເບິ່ງການຈັດລະບຽບຂອງເນື້ອເຍື່ອຮາກ. ສັນຍານ PI ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence ໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດສະແກນເລເຊີ TCS SPE confocal (Leica Microsystems).
ການຍ້ອມສີຮາກດ້ວຍ β-glucuronidase (GUS) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມໂປໂຕຄອນທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໂດຍ Malami ແລະ Benfey36. ເບ້ຍໄມ້ໄດ້ຖືກແຊ່ແຂງໃນ acetone 90% ຄ້າງຄືນ, ຍ້ອມສີດ້ວຍ 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic acid ໃນບັຟເຟີ GUS ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ວາງໄວ້ໃນສານລະລາຍ chloraldehyde ທີ່ມີ hydrated. (chloral hydrate 8 g, ນ້ຳ 2 ml ແລະ glycerol 1 ml) ແລະ ສັງເກດເຫັນໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດທີ່ມີຄວາມຄົມຊັດແຕກຕ່າງກັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Axio Imager M1 (Carl Zeiss).
ມຸມຂອງຮາກໄດ້ຖືກວັດແທກໃສ່ເບ້ຍໄມ້ອາຍຸ 7 ມື້ທີ່ປູກຢູ່ເທິງແຜ່ນທີ່ວາງຕັ້ງ. ວັດແທກມຸມຂອງຮາກຈາກທິດທາງຂອງເວັກເຕີແຮງໂນ້ມຖ່ວງຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນຂັ້ນຕອນທີ 6.
ການຈັດລຽງຂອງ microtubules cortical ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້, ໂດຍມີການດັດແປງເລັກນ້ອຍຕໍ່ໂປໂຕຄອນ 37. ພູມຕ້ານທານຕ້ານ β-tubulin (KMX-1, Merk Millipore: MAB3408) ແລະ Alexa Fluor 488-conjugated anti-mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A32723) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນພູມຕ້ານທານຂັ້ນຕົ້ນ ແລະ ຂັ້ນສອງທີ່ຄວາມລະລາຍ 1:1000 ແລະ 1:100 ຕາມລໍາດັບ. ຮູບພາບການເຍືອງແສງໄດ້ຖືກເກັບມາໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດສະແກນເລເຊີ TCS SPE confocal (Leica Microsystems). ເກັບຮູບພາບ Z-stack ແລະ ສ້າງການສະແດງຄວາມເຂັ້ມສູງສຸດຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.
ການທົດສອບການເພີ່ມຈຳນວນຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ຊຸດນັບຈຸລັງ 8 (Dojindo) ຕາມຄຳແນະນຳຂອງຜູ້ຜະລິດ.
ການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງ E. coli DH5α ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວັດແທກຄວາມໜາແໜ້ນຂອງຈຸລັງໃນການເພາະເລี้ยงໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງວັດແທກແສງສະເປກໂຕຣໂຟໂຕມິເຕີທີ່ 600 nm (OD600).
ການຈັດລະບຽບໂຄງກະດູກໃນຈຸລັງ BY-2 ທີ່ຖືກດັດແປງພັນທຸກໍາໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence ທີ່ຕິດຕັ້ງດ້ວຍອຸປະກອນສະແກນ confocal CSU-X1 (Yokogawa) ແລະກ້ອງຖ່າຍຮູບ sCMOS (Zyla, Andor Technology). ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງໂຄງກະດູກໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍການວິເຄາະຮູບພາບ, ເຊິ່ງໄດ້ຄິດໄລ່ອັດຕາສ່ວນຂອງພິກເຊວໂຄງກະດູກໃນບັນດາພິກເຊວ cytoplasmic ໃນຮູບພາບ confocal ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ ImageJ ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້38,39.
ເພື່ອກວດຫາການຕາຍຂອງເຊວໃນເຊວ BY-2, ສ່ວນປະສົມຂອງເຊວລະລາຍໄດ້ຖືກບົ່ມດ້ວຍສີຟ້າ Evans 0.05% ເປັນເວລາ 10 ນາທີທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ການຍ້ອມສີສີຟ້າ Evans ແບບເລືອກເຟັ້ນຂອງເຊວທີ່ຕາຍແລ້ວແມ່ນຂຶ້ນກັບການລະບາຍສີຍ້ອມອອກຈາກເຊວທີ່ມີຊີວິດໂດຍເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງທີ່ຍັງຄົງຢູ່40. ເຊວທີ່ຍ້ອມສີໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດພາກສະໜາມສະຫວ່າງ (BX53, Olympus).
ຈຸລັງ HeLa ໄດ້ຖືກປູກໃນ DMEM ທີ່ເສີມດ້ວຍ 10% FBS ໃນຕູ້ອົບທີ່ມີຄວາມຊຸ່ມຢູ່ທີ່ 37°C ແລະ 5% CO2. ຈຸລັງໄດ້ຮັບການຮັກສາດ້ວຍ 100 μM KAND 11, kumamonamic acid 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml colcemid (Gibco), ຫຼື 100 ng/ml Nocodmaze (Sigma) ເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37°C. ຈຸລັງໄດ້ຖືກແກ້ໄຂດ້ວຍ MetOH ເປັນເວລາ 10 ນາທີ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນດ້ວຍ acetate ເປັນເວລາ 5 ນາທີທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ຈຸລັງທີ່ຖືກແກ້ໄຂໄດ້ຖືກຟັກດ້ວຍພູມຕ້ານທານປະຖົມ β-tubulin (1D4A4, Proteintech: 66240-1) ທີ່ເຈືອຈາງໃນ 0.5% BSA/PBS ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງ, ລ້າງ 3 ຄັ້ງດ້ວຍ TBST, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຟັກດ້ວຍພູມຕ້ານທານແບ້ Alexa Fluor. 488 1 ຊົ່ວໂມງ. – IgG ຂອງໜູ (Thermo Fisher Scientific: A11001) ແລະ 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ທີ່ເຈືອຈາງໃນ 0.5% BSA/PBS. ຫຼັງຈາກລ້າງດ້ວຍ TBST ສາມເທື່ອ, ຈຸລັງທີ່ມີສີໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon Eclipse Ti-E ແບບປີ້ນກັບ. ຮູບພາບໄດ້ຖືກຖ່າຍດ້ວຍກ້ອງ CCD Hamamatsu ORCA-R2 ທີ່ເຢັນໂດຍໃຊ້ຊອບແວ MetaMorph (Molecular Devices).
ເວລາໂພສ: 17 ມິຖຸນາ 2024