ຢາຂ້າແມ່ທ້ອງ N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າຍັບຍັ້ງ AChE (acetylcholinesterase) ແລະມີຄຸນສົມບັດທີ່ອາດເຮັດໃຫ້ເກີດມະເຮັງເນື່ອງຈາກການມີເສັ້ນເລືອດຫຼາຍເກີນໄປ. ໃນເອກະສານສະບັບນີ້, ພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ DEET ກະຕຸ້ນຈຸລັງ endothelial ໂດຍສະເພາະທີ່ສົ່ງເສີມການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເພີ່ມການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກ. DEET ກະຕຸ້ນຂະບວນການຂອງຈຸລັງທີ່ນໍາໄປສູ່ການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່, ລວມທັງການຂະຫຍາຍຕົວ, ການເຄື່ອນຍ້າຍ, ແລະການຍຶດຕິດ. ສິ່ງນີ້ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຜະລິດ NO ແລະການສະແດງອອກ VEGF ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນໃນຈຸລັງ endothelial. ການປິດ M3 ຫຼືການໃຊ້ຕົວຍັບຍັ້ງ M3 ທາງຢາໄດ້ລົບລ້າງຜົນກະທົບທັງໝົດເຫຼົ່ານີ້, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ທີ່ເກີດຈາກ DEET ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ M3. ການທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບສັນຍານແຄວຊຽມໃນຈຸລັງ endothelial ແລະ HEK ທີ່ສະແດງອອກຕົວຮັບ M3 ຫຼາຍເກີນໄປ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການສຶກສາການຜູກມັດແລະການຈອດ, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ DEET ເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຕົວປັບ allosteric ຂອງຕົວຮັບ M3. ນອກຈາກນັ້ນ, DEET ຍັບຍັ້ງ AChE, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເພີ່ມການດູດຊຶມທາງຊີວະພາບຂອງ acetylcholine ແລະການຜູກມັດຂອງມັນກັບຕົວຮັບ M3, ແລະເສີມຂະຫຍາຍຜົນກະທົບ proangiogenic ຜ່ານການຄວບຄຸມ allosteric.
ECs ປະຖົມໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກ aorta ຂອງໜູສະວິດ. ວິທີການສະກັດໄດ້ຖືກດັດແປງມາຈາກໂປໂຕຄອນ Kobayashi 26. ECs ໜູໄດ້ຖືກเพาะเลี้ยงໃນອາຫານ EBM-2 ທີ່ເສີມດ້ວຍ FBS ທີ່ຖືກເຮັດໃຫ້ບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວດ້ວຍຄວາມຮ້ອນ 5% ຈົນກ່ວາທາງຜ່ານທີສີ່.
ຜົນກະທົບຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສອງຢ່າງຂອງ DEET ຕໍ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ HUVEC, U87MG, ຫຼື BF16F10 ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ຊຸດການທົດສອບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ CyQUANT (Molecular Probes, C7026). ໂດຍຫຍໍ້, ຈຸລັງ 5.103 ຈຸລັງຕໍ່ບໍ່ໄດ້ຖືກຫວ່ານໃນແຜ່ນ 96 ບໍ່, ປ່ອຍໃຫ້ຕິດຄ້າງຄືນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ. ຫຼັງຈາກເອົາສານກາງການເຕີບໂຕອອກແລ້ວ, ໃຫ້ຕື່ມສານລະລາຍທີ່ຜູກມັດສີໃສ່ແຕ່ລະບໍ່ຂອງແຜ່ນໄມໂຄຣ ແລະ ບົ່ມຈຸລັງທີ່ອຸນຫະພູມ 37 °C ເປັນເວລາ 30 ນາທີ. ລະດັບການເຍືອງແສງໄດ້ຖືກກຳນົດໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນໄມໂຄຣຫຼາຍໂໝດ Mithras LB940 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, ເຢຍລະມັນ) ທີ່ມີຕົວກອງການກະຕຸ້ນ 485 nm ແລະ ຕົວກອງການປ່ອຍແສງ 530 nm.
HUVEC ໄດ້ຖືກຫວ່ານໃນແຜ່ນ 96 ຫຼຸມທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນ 104 ຈຸລັງຕໍ່ຫຼຸມ. ຈຸລັງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ. ຄວາມຢູ່ລອດຂອງຈຸລັງໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ MTT ແບບສີ (Sigma-Aldrich, M5655). ຄ່າຄວາມໜາແໜ້ນທາງແສງໄດ້ຮັບໃນເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນໄມໂຄຣແພລດຫຼາຍຮູບແບບ (Mithras LB940) ທີ່ຄວາມຍາວຄື້ນ 570 nm.
ຜົນກະທົບຂອງ DEET ໄດ້ຖືກສຶກສາໂດຍໃຊ້ການທົດສອບການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ໃນຫຼອດທົດລອງ. ການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET 10-8 M ຫຼື 10-5 M ເພີ່ມການສ້າງຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍໃນ HUVECs (ຮູບທີ 1a, b, ແຖບສີຂາວ). ເມື່ອປຽບທຽບກັບກຸ່ມຄວບຄຸມ, ການປິ່ນປົວດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DEET ຕັ້ງແຕ່ 10-14 ຫາ 10-5 M ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍບັນລຸຈຸດສູງສຸດທີ່ DEET 10-8 M (ຮູບເສີມ S2). ບໍ່ພົບຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນໃນຜົນກະທົບ proangiogenic ໃນຫຼອດທົດລອງຂອງ HUVECs ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ໃນລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 10-8 M ແລະ 10-5 M.
ເພື່ອກຳນົດຜົນກະທົບຂອງ DEET ຕໍ່ການເກີດເສັ້ນເລືອດໃໝ່, ພວກເຮົາໄດ້ດຳເນີນການສຶກສາການເກີດເສັ້ນເລືອດໃໝ່ໃນຮ່າງກາຍ. ຫຼັງຈາກ 14 ມື້, ໜູທີ່ຖືກສັກດ້ວຍຈຸລັງ endothelial ທີ່เพาะเลี้ยงລ່ວງໜ້າດ້ວຍ DEET 10-8 M ຫຼື 10-5 M ສະແດງໃຫ້ເຫັນການເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຂອງປະລິມານຮີໂມໂກຼບິນ (ຮູບທີ 1c, ແຖບສີຂາວ).
ນອກຈາກນັ້ນ, ການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ທີ່ເກີດຈາກ DEET ໄດ້ຖືກສຶກສາໃນໜູທີ່ມີ U87MG xenograft ທີ່ຖືກສັກ DEET ທຸກໆມື້ (ip) ໃນປະລິມານທີ່ຮູ້ວ່າກະຕຸ້ນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ plasma 10-5 M, ເຊິ່ງເປັນເລື່ອງປົກກະຕິໃນມະນຸດທີ່ໄດ້ຮັບສານ. ໃນ 23. ເນື້ອງອກທີ່ກວດພົບໄດ້ (ເຊັ່ນ: ເນື້ອງອກ >100 mm3) ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ 14 ມື້ຫຼັງຈາກການສັກຈຸລັງ U87MG ເຂົ້າໄປໃນໜູ. ໃນມື້ທີ 28, ການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອງອກໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນໜູທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ເມື່ອທຽບກັບໜູຄວບຄຸມ (ຮູບທີ 1d, ຮູບສີ່ຫຼ່ຽມ). ນອກຈາກນັ້ນ, ການຍ້ອມສີ CD31 ຂອງເນື້ອງອກສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ DEET ເພີ່ມພື້ນທີ່ capillary ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍແຕ່ບໍ່ເພີ່ມຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ microvasels. (ຮູບທີ 1e–g).
ເພື່ອກຳນົດບົດບາດຂອງຕົວຮັບ muscarinic ໃນການຂະຫຍາຍຕົວທີ່ເກີດຈາກ DETA, 10-8 M ຫຼື 10-5 M DETA ໃນເວລາທີ່ມີ pFHHSiD (10-7 M, ຕົວຕ້ານຕົວຮັບ M3 ທີ່ເລືອກເຟັ້ນ) ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້. ການປິ່ນປົວ HUVEC. pFHHSiD ໄດ້ສະກັດກັ້ນຄຸນສົມບັດການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ DETA ຢ່າງສິ້ນເຊີງໃນທຸກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ (ຕາຕະລາງທີ 1).
ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂເຫຼົ່ານີ້, ພວກເຮົາຍັງໄດ້ກວດສອບວ່າ DEET ຈະເພີ່ມຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍໃນຈຸລັງ HUVEC ຫຼືບໍ່. ໃນລັກສະນະດຽວກັນ, pFHHSiD ໄດ້ປ້ອງກັນຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍທີ່ເກີດຈາກ DEET ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ຮູບທີ 1a, b, ແຖບສີເທົາ). ນອກຈາກນັ້ນ, ການທົດລອງທີ່ຄ້າຍຄືກັນໄດ້ຖືກປະຕິບັດກັບ M3 siRNA. ເຖິງແມ່ນວ່າ siRNA ຄວບຄຸມບໍ່ມີປະສິດທິພາບໃນການສົ່ງເສີມການສ້າງເສັ້ນເລືອດຝອຍ, ແຕ່ການປິດບັງຕົວຮັບ M3 muscarinic ໄດ້ລົບລ້າງຄວາມສາມາດຂອງ DEET ໃນການເພີ່ມຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍ (ຮູບທີ 1a, b, ແຖບສີດຳ).
ນອກຈາກນັ້ນ, ທັງການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃນຫຼອດທົດລອງ ແລະ ການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ໃນຮ່າງກາຍທີ່ເກີດຈາກ DEET 10-8 M ຫຼື 10-5 M ໄດ້ຖືກສະກັດກັ້ນຢ່າງສົມບູນໂດຍ pFHHSiD (ຮູບທີ 1c, d, ວົງມົນ). ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ DEET ສົ່ງເສີມການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ຜ່ານເສັ້ນທາງທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບຕົວຕ້ານຕົວຮັບ M3 ທີ່ເລືອກເຟັ້ນ ຫຼື M3 siRNA.
AChE ແມ່ນເປົ້າໝາຍທາງໂມເລກຸນຂອງ DEET. ຢາເຊັ່ນ donepezil, ເຊິ່ງເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ AChE, ສາມາດກະຕຸ້ນການສ້າງເສັ້ນເລືອດໃໝ່ EC ໃນຫຼອດທົດລອງ ແລະ ໃນຮູບແບບການອຸດຕັນຂອງກ້າມຊີ້ນຂາຫຼັງຂອງໜູ14. ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບຜົນກະທົບຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສອງຢ່າງຂອງ DEET ຕໍ່ກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊ AChE ໃນ HUVEC. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່ຳ (10-8 M) ແລະ ສູງ (10-5 M) ຂອງ DEET ຫຼຸດກິດຈະກຳ AChE ຂອງເສັ້ນເລືອດໃນເນື້ອເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງລົງເມື່ອທຽບກັບເງື່ອນໄຂການຄວບຄຸມ (ຮູບທີ 2).
ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທັງສອງຂອງ DEET (10-8 M ແລະ 10-5 M) ຫຼຸດກິດຈະກຳ acetylcholinesterase ໃນ HUVEC. BW284c51 (10-5 M) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຄວບຄຸມສໍາລັບຕົວຍັບຍັ້ງ acetylcholinesterase. ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງເປັນເປີເຊັນຂອງກິດຈະກຳ AChE ໃນ HUVEC ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ສອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນເມື່ອທຽບກັບຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍພາຫະນະ. ຄ່າແມ່ນສະແດງເປັນຄ່າສະເລ່ຍ ± SEM ຂອງການທົດລອງເອກະລາດຫົກຄັ້ງ. *p < 0.05 ເມື່ອທຽບກັບການຄວບຄຸມ (ການທົດສອບການປຽບທຽບຫຼາຍຄັ້ງ Kruskal-Wallis ແລະ Dunn).
ໄນຕຣິກອອກໄຊ (NO) ມີສ່ວນຮ່ວມໃນຂະບວນການ angiogenic 33, ດັ່ງນັ້ນ, ການຜະລິດ NO ໃນ HUVECs ທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍ DEET ໄດ້ຖືກສຶກສາ. ການຜະລິດ NO endothelial ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນເມື່ອທຽບກັບຈຸລັງຄວບຄຸມ, ແຕ່ບັນລຸຄວາມສຳຄັນພຽງແຕ່ໃນປະລິມານ 10-8 M (ຮູບທີ 3c). ເພື່ອກຳນົດການປ່ຽນແປງທາງໂມເລກຸນທີ່ຄວບຄຸມການຜະລິດ NO ທີ່ເກີດຈາກ DEET, ການສະແດງອອກ ແລະ ການກະຕຸ້ນຂອງ eNOS ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ Western blotting. ເຖິງແມ່ນວ່າການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEET ບໍ່ໄດ້ປ່ຽນແປງການສະແດງອອກຂອງ eNOS, ແຕ່ມັນໄດ້ເພີ່ມການຟອສຟໍຣິເລຊັນຂອງ eNOS ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຢູ່ບໍລິເວນກະຕຸ້ນຂອງມັນ (Ser-1177) ໃນຂະນະທີ່ຫຼຸດບໍລິເວນຍັບຍັ້ງຂອງມັນ (Thr-495) ເມື່ອທຽບກັບຈຸລັງທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວໃນການຟອສຟໍຣິເລຊັນຂອງ eNOS (ຮູບທີ 3d). ນອກຈາກນັ້ນ, ອັດຕາສ່ວນຂອງ eNOS ທີ່ຖືກຟອສຟໍຣິເລຊັນຢູ່ບໍລິເວນກະຕຸ້ນ ແລະ ບໍລິເວນຍັບຍັ້ງໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຫຼັງຈາກການເຮັດໃຫ້ປະລິມານຂອງ eNOS ທີ່ຖືກຟອສຟໍຣິເລຊັນເປັນປົກກະຕິຕໍ່ປະລິມານທັງໝົດຂອງ enzyme. ອັດຕາສ່ວນນີ້ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນ HUVECs ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍແຕ່ລະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DEET ເມື່ອທຽບກັບຈຸລັງທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ (ຮູບທີ 3d).
ສຸດທ້າຍ, ການສະແດງອອກຂອງ VEGF, ໜຶ່ງໃນປັດໄຈຫຼັກທີ່ກໍ່ໃຫ້ເກີດເສັ້ນເລືອດແດງ, ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ Western blotting. DEET ເພີ່ມການສະແດງອອກຂອງ VEGF ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ໃນຂະນະທີ່ pFHHSiD ສະກັດກັ້ນການສະແດງອອກນີ້ໄດ້ຢ່າງສົມບູນ.
ເນື່ອງຈາກຜົນກະທົບຂອງ DEET ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບທັງການສະກັດກັ້ນທາງດ້ານການຢາ ແລະ ການຫຼຸດລົງຂອງຕົວຮັບ M3, ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບສົມມຸດຕິຖານທີ່ວ່າ DEET ອາດຈະເສີມຂະຫຍາຍການສົ່ງສັນຍານຂອງແຄວຊຽມ. ໜ້າແປກໃຈທີ່ DEET ບໍ່ສາມາດເພີ່ມແຄວຊຽມໃນ cytoplasm ໃນ HUVEC (ຂໍ້ມູນບໍ່ໄດ້ສະແດງ) ແລະ HEK/M3 (ຮູບທີ 4a, b) ສຳລັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທັງສອງທີ່ໃຊ້.
ເວລາໂພສ: ວັນທີ 30 ທັນວາ 2024