ວັດສະດຸພືດ ແລະ ເຊື້ອພະຍາດ
ປະຊາກອນການສ້າງແຜນທີ່ຄວາມສຳພັນຂອງເຂົ້າສາລີທີ່ຮູ້ຈັກກັນໃນນາມປະຊາກອນການປ່ຽນແປງເຂົ້າສາລີ (SCP) ໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ໂດຍທ່ານດຣ Pat Brown ທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Illinois (ປະຈຸບັນຢູ່ທີ່ UC Davis). ມັນໄດ້ຖືກອະທິບາຍມາກ່ອນໜ້ານີ້ ແລະ ເປັນການລວບລວມຂອງສາຍພັນທີ່ຫຼາກຫຼາຍທີ່ປ່ຽນໄປສູ່ຄວາມບໍ່ອ່ອນໄຫວຕໍ່ຊ່ວງແສງ ແລະ ຄວາມສູງທີ່ນ້ອຍກວ່າເພື່ອອຳນວຍຄວາມສະດວກໃຫ້ແກ່ການເຕີບໂຕ ແລະ ການພັດທະນາຂອງພືດໃນສະພາບແວດລ້ອມຂອງສະຫະລັດ. ສາຍພັນ 510 ສາຍຈາກປະຊາກອນນີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ ເຖິງແມ່ນວ່າເນື່ອງຈາກການແຕກງອກທີ່ບໍ່ດີ ແລະ ບັນຫາການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບອື່ນໆ, ບໍ່ແມ່ນສາຍພັນທັງໝົດໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການວິເຄາະລັກສະນະທັງສາມຢ່າງ. ໃນທີ່ສຸດ ຂໍ້ມູນຈາກ 345 ສາຍພັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະການຕອບສະໜອງຂອງໄຄຕິນ, 472 ສາຍສໍາລັບການຕອບສະໜອງຂອງ flg22, ແລະ 456 ສາຍສໍາລັບການຕ້ານທານ TLS.ຂ. ຄຸກກີເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ LSLP18 ໄດ້ຮັບມາຈາກທ່ານດຣ. Burt Bluhm ທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Arkansas.
ການວັດແທກການຕອບສະໜອງຂອງ MAMP
MAMP ສອງຊະນິດທີ່ແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃນການສຶກສາຄັ້ງນີ້, flg22, (ລາຍການ Genscript# RP19986), ແລະ ໄຄຕິນ. ຕົ້ນເຂົ້າສາລີໄດ້ຖືກປູກໃນແຜ່ນທີ່ວາງໄວ້ເທິງພື້ນທີ່ຮາບພຽງທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍດິນ (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ໃນເຮືອນແກ້ວ. ຕົ້ນໄມ້ໄດ້ຖືກຫົດນ້ຳໃນມື້ກ່ອນການເກັບຕົວຢ່າງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຂອງໃບເພີ່ມເຕີມໃນມື້ທີ່ເກັບຕົວຢ່າງ.
ສາຍພັນຕ່າງໆໄດ້ຖືກສຸ່ມ ແລະ ດ້ວຍເຫດຜົນດ້ານການຂົນສົ່ງ, ໄດ້ຖືກປູກເປັນຊຸດໆ ຈຳນວນ 60 ສາຍພັນ. ສຳລັບແຕ່ລະສາຍພັນ, ປູກ 'ກະຖາງ' ສາມຕົ້ນດ້ວຍສອງເມັດຕໍ່ສາຍພັນ. ຊຸດຕໍ່ໆມາໄດ້ຖືກປູກທັນທີທີ່ຊຸດກ່ອນໜ້ານີ້ໄດ້ຖືກປຸງແຕ່ງຈົນກວ່າປະຊາກອນທັງໝົດຈະຖືກປະເມີນ. ການທົດລອງສອງຄັ້ງໄດ້ຖືກດຳເນີນສຳລັບ MAMP ທັງສອງທີ່ມີ genotypes ທີ່ຖືກສຸ່ມໃໝ່ໃນແຕ່ລະສອງຊຸດ.
ການທົດສອບ ROS ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້. ໂດຍຫຍໍ້, ສຳລັບແຕ່ລະສາຍພັນ, ເມັດພັນຫົກເມັດໄດ້ຖືກປູກໃນ 3 ກະຖາງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ຈາກເບ້ຍໄມ້ທີ່ໄດ້ຮັບ, ສາມເມັດໄດ້ຖືກຄັດເລືອກໂດຍອີງໃສ່ຄວາມສະໝໍ່າສະເໝີ. ເບ້ຍໄມ້ທີ່ເບິ່ງຄືວ່າຜິດປົກກະຕິ ຫຼື ສູງ ຫຼື ສັ້ນກວ່າສ່ວນໃຫຍ່ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍບໍ່ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້. ແຜ່ນໃບສີ່ແຜ່ນທີ່ມີເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 3 ມມ ໄດ້ຖືກຕັດອອກຈາກສ່ວນທີ່ກວ້າງທີ່ສຸດຂອງໃບທີ 4 ຂອງຕົ້ນເຂົ້າສາລີອາຍຸ 15 ວັນສາມຕົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ແຜ່ນໜຶ່ງແຜ່ນຕໍ່ໃບຈາກສອງຕົ້ນ ແລະ ສອງແຜ່ນຈາກຕົ້ນໜຶ່ງ, ໂດຍແຜ່ນທີສອງຈະກາຍເປັນຕົວຄວບຄຸມນ້ຳ (ເບິ່ງຂ້າງລຸ່ມນີ້). ແຜ່ນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກລອຍແຍກຕ່າງຫາກໃນ H20 50 µl ໃນແຜ່ນສີດຳ 96 ຫຼຸມ, ປະທັບຕາດ້ວຍປະທັບຕາອາລູມິນຽມເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການສຳຜັດກັບແສງ, ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງຄ້າງຄືນ. ໃນຕອນເຊົ້າມື້ຕໍ່ມາ, ສານລະລາຍປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກຜະລິດໂດຍໃຊ້ໂພຣບ chemiluminescent L-012 2 mg/ml (Wako, ລາຍການເລກທີ # 120-04891), horseradish peroxidase 2 mg/ml (ປະເພດ VI-A, Sigma-Aldrich, ລາຍການເລກທີ # P6782), ແລະ Chitin 100 mg/ml ຫຼື Flg22 2 μM. ສານລະລາຍປະຕິກິລິຍານີ້ 50 µl ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ສາມໃນສີ່ບໍ່. ບໍ່ທີສີ່ແມ່ນຕົວຄວບຄຸມແບບຈຳລອງ, ເຊິ່ງສານລະລາຍປະຕິກິລິຍາທີ່ບໍ່ລວມເອົາ MAMP ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໄປ. ບໍ່ຫວ່າງສີ່ບໍ່ທີ່ມີແຕ່ນ້ຳກໍ່ຖືກລວມເຂົ້າໃນແຕ່ລະແຜ່ນເຊັ່ນກັນ.
ຫຼັງຈາກເພີ່ມສານລະລາຍປະຕິກິລິຍາແລ້ວ, ຄວາມສະຫວ່າງໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນຈຸລະພາກ SynergyTM 2 ຫຼາຍຄັ້ງ (BioTek) ທຸກໆ 2 ນາທີ ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ. ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນຈະວັດແທກຄວາມສະຫວ່າງທຸກໆ 2 ນາທີ ໃນລະຫວ່າງ 1 ຊົ່ວໂມງນີ້. ຜົນລວມຂອງການອ່ານທັງໝົດ 31 ຄັ້ງໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ເພື່ອໃຫ້ຄ່າສຳລັບແຕ່ລະບໍ່. ຄ່າປະມານສຳລັບການຕອບສະໜອງ MAMP ສຳລັບແຕ່ລະ genotype ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ເປັນ (ຄ່າຄວາມສະຫວ່າງສະເລ່ຍຂອງສາມບໍ່ທົດລອງ - ຄ່າບໍ່ທົດລອງ) - ລົບຄ່າສະເລ່ຍຂອງບໍ່ເປົ່າ. ຄ່າບໍ່ເປົ່າຢູ່ໃກ້ກັບສູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ.
ແຜ່ນໃບຂອງນິໂຄຕີອານາ ເບັນທາມິນາ, ສາຍພັນເຂົ້າຟ່າງທີ່ຕອບສະໜອງສູງໜຶ່ງສາຍ (SC0003), ແລະ ສາຍພັນເຂົ້າຟ່າງທີ່ຕອບສະໜອງຕ່ຳໜຶ່ງສາຍ (PI 6069) ກໍ່ຖືກລວມເຂົ້າເປັນຕົວຄວບຄຸມໃນແຕ່ລະແຜ່ນ 96 ບໍ່ ເພື່ອຈຸດປະສົງການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ.
ຂ. ຄຸກກີການກະກຽມເຊື້ອພະຍາດ ແລະ ການສັກຢາວັກຊີນ
ຂ. ຄຸກກີເຊື້ອພະຍາດໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້. ໂດຍຫຍໍ້, ເມັດເຂົ້າສາລີໄດ້ຖືກແຊ່ນ້ຳເປັນເວລາສາມມື້, ລ້າງ, ຕັກໃສ່ຂວດຮູບຈວຍ 1 ລິດ ແລະ ອົບດ້ວຍຄວາມຮ້ອນເປັນເວລາໜຶ່ງຊົ່ວໂມງທີ່ອຸນຫະພູມ 15psi ແລະ 121°C. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເມັດພືດໄດ້ຖືກສັກເຊື້ອດ້ວຍເຊື້ອເຫັດປະມານ 5 ມລ ທີ່ແຊ່ນ້ຳຈາກເຊື້ອເຫັດສົດຂອງຂ. ຄຸກກີLSLP18 ແຍກເຊື້ອ ແລະ ປະໄວ້ 2 ອາທິດທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ສັ່ນຂວດທຸກໆ 3 ມື້. ຫຼັງຈາກ 2 ອາທິດ, ເມັດເຂົ້າສາລີທີ່ມີເຊື້ອລາຈະຖືກຕາກແຫ້ງໃນອາກາດ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4°C ຈົນກວ່າຈະມີການຕິດເຊື້ອໃນນາ. ເຊື້ອລາຊະນິດດຽວກັນນີ້ຖືກນຳໃຊ້ສຳລັບການທົດລອງທັງໝົດ ແລະ ເຮັດໃຫ້ສົດທຸກໆປີ. ສຳລັບການຕິດເຊື້ອ, ເມັດເຂົ້າສາລີທີ່ມີເຊື້ອລາ 6-10 ເມັດຖືກວາງລົງໃນວົງຂອງຕົ້ນເຂົ້າສາລີອາຍຸ 4-5 ອາທິດ. ສະປໍທີ່ຜະລິດຈາກເຊື້ອລາເຫຼົ່ານີ້ເລີ່ມການຕິດເຊື້ອໃນຕົ້ນເຂົ້າສາລີອ່ອນພາຍໃນໜຶ່ງອາທິດ.
ການກະກຽມເມັດພັນ
ກ່ອນການປູກໃນທົ່ງນາ, ແກ່ນເຂົ້າສາລີໄດ້ຮັບການປະບັດດ້ວຍຢາຂ້າເຊື້ອລາ, ຢາຂ້າແມງໄມ້, ແລະສ່ວນປະສົມຂອງຢາຂ້າເຊື້ອລາ Spirato 480 FS ປະມານ 1%, ຢາຂ້າເຊື້ອລາ Sebring 480 FS 4%, ຢາຂ້າເຊື້ອລາ Sorpro 940 ES 3%. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແກ່ນໄດ້ຖືກຕາກແຫ້ງດ້ວຍອາກາດເປັນເວລາ 3 ມື້ ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ສ່ວນປະສົມນີ້ເຄືອບບາງໆອ້ອມຮອບແກ່ນ. ຢາຂ້າເຊື້ອລາອະນຸຍາດໃຫ້ໃຊ້ຢາຂ້າຫຍ້າ Dual Magnum ເປັນຢາກ່ອນການງອກ.
ການປະເມີນຄວາມຕ້ານທານຂອງຈຸດໃບໄມ້ເປົ້າໝາຍ
SCP ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ສະຖານີຄົ້ນຄວ້າພືດສູນກາງໃນ Clayton, NC ໃນວັນທີ 14-15 ມິຖຸນາ 2017 ແລະ 20 ມິຖຸນາ 2018 ໃນການອອກແບບບລັອກທີ່ສົມບູນແບບແບບສຸ່ມ ໂດຍມີສອງການທົດລອງຊ້ຳກັນໃນແຕ່ລະກໍລະນີ. ການທົດລອງໄດ້ຖືກປູກໃນແຖວດຽວ 1.8 ແມັດ ທີ່ມີຄວາມກວ້າງຂອງແຖວ 0.9 ແມັດ ໂດຍໃຊ້ເມັດພັນ 10 ເມັດຕໍ່ແປງ. ແຖວຂອບສອງແຖວໄດ້ຖືກປູກອ້ອມຮອບຂອບຂອງແຕ່ລະການທົດລອງເພື່ອປ້ອງກັນຜົນກະທົບຂອງແຄມ. ການທົດລອງໄດ້ຖືກສັກເຊື້ອໃນວັນທີ 20 ກໍລະກົດ 2017 ແລະ 20 ກໍລະກົດ 2018 ເຊິ່ງເປັນຈຸດທີ່ຕົ້ນເຂົ້າສາລີຢູ່ໃນໄລຍະການເຕີບໂຕ 3. ການໃຫ້ຄະແນນໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນລະດັບໜຶ່ງຫາເກົ້າ, ບ່ອນທີ່ຕົ້ນໄມ້ທີ່ບໍ່ມີອາການຂອງພະຍາດໄດ້ຖືກໃຫ້ຄະແນນເປັນເກົ້າ ແລະ ຕົ້ນໄມ້ທີ່ຕາຍໝົດໄດ້ຖືກໃຫ້ຄະແນນເປັນໜຶ່ງ. ການໃຫ້ຄະແນນສອງຄັ້ງໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນປີ 2017 ແລະ ການອ່ານສີ່ຄັ້ງໃນປີ 2018 ເລີ່ມຕົ້ນສອງອາທິດຫຼັງຈາກການສັກຢາໃນແຕ່ລະປີ. sAUDPC (ພື້ນທີ່ມາດຕະຖານພາຍໃຕ້ເສັ້ນໂຄ້ງຄວາມຄືບໜ້າຂອງພະຍາດ) ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້.
ເວລາໂພສ: ເມສາ-01-2021