ພືດແລະວັດສະດຸເຊື້ອພະຍາດ
ການສ້າງແຜນທີ່ສະມາຄົມ sorghum ທີ່ເອີ້ນວ່າປະຊາກອນການປ່ຽນ sorghum (SCP) ແມ່ນສະຫນອງໃຫ້ໂດຍທ່ານດຣ Pat Brown ທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Illinois (ປະຈຸບັນຢູ່ທີ່ UC Davis).ມັນໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ແລະເປັນການເກັບກໍາຂອງສາຍທີ່ຫຼາກຫຼາຍຊະນິດປ່ຽນເປັນ photoperiod-insensitivity ແລະ stature ຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າເພື່ອຄວາມສະດວກການຂະຫຍາຍຕົວແລະການພັດທະນາຂອງພືດໃນສະພາບແວດລ້ອມສະຫະລັດ.510 ສາຍຈາກປະຊາກອນນີ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ເຖິງແມ່ນວ່າເນື່ອງຈາກການແຕກງອກທີ່ບໍ່ດີແລະບັນຫາການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບອື່ນໆ, ບໍ່ແມ່ນສາຍທັງຫມົດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການວິເຄາະສາມລັກສະນະ.ໃນທີ່ສຸດຂໍ້ມູນຈາກ 345 ເສັ້ນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະການຕອບສະຫນອງຂອງ chitin, 472 ສາຍສໍາລັບການຕອບສະຫນອງ flg22, ແລະ 456 ສໍາລັບການຕໍ່ຕ້ານ TLS.B. Cookeiເມື່ອຍ LSLP18 ໄດ້ມາຈາກທ່ານດຣ Burt Bluhm ທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Arkansas.
ການວັດແທກການຕອບສະໜອງ MAMP
ສອງ MAMPs ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ flg22, (Genscript catalog# RP19986), ແລະ chitin .ພືດ Sorghum ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນບ່ອນຝັງດິນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍດິນ (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ໃນເຮືອນແກ້ວ.ພືດໄດ້ຖືກຫົດນ້ໍາໃນມື້ກ່ອນການເກັບຕົວຢ່າງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນຄວາມຊຸ່ມຊື້ນຂອງໃບເພີ່ມເຕີມໃນມື້ເກັບ.
ສາຍໄດ້ຖືກ Randomized ແລະ, ສໍາລັບເຫດຜົນດ້ານການຂົນສົ່ງ, ໄດ້ຖືກປູກໃນ batch ຂອງ 60 ສາຍ.ສໍາລັບແຕ່ລະສາຍ, ສາມ 'pots' ໄດ້ຖືກປູກດ້ວຍສອງເມັດຕໍ່ເສັ້ນ.batch ຕໍ່ມາໄດ້ຖືກປູກທັນທີທີ່ batch ທີ່ຜ່ານມາໄດ້ຮັບການປຸງແຕ່ງຈົນກ່ວາປະຊາຊົນທັງຫມົດໄດ້ຮັບການປະເມີນ.ສອງໄລຍະທົດລອງໄດ້ຖືກດໍາເນີນສໍາລັບທັງສອງ MAMPs ທີ່ມີ genotypes re-randomized ໃນແຕ່ລະສອງແລ່ນ.
ການວິເຄາະ ROS ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.ໂດຍຫຍໍ້, ສໍາລັບແຕ່ລະເສັ້ນ, ຫົກເມັດໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນ 3 ຫມໍ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຈາກເບ້ຍທີ່ໄດ້ຮັບຜົນ, ສາມໄດ້ຖືກຄັດເລືອກໂດຍອີງໃສ່ຄວາມເປັນເອກະພາບ.ເບ້ຍໄມ້ທີ່ມີລັກສະນະຜິດປົກກະຕິ ຫຼືສູງ ຫຼືສັ້ນກວ່າສ່ວນຫຼາຍແມ່ນບໍ່ໄດ້ນຳໃຊ້.ແຜ່ນໃບສີ່ແຜ່ນທີ່ມີເສັ້ນຜ່າກາງ 3 ມມ ໄດ້ຖືກຕັດອອກຈາກສ່ວນກວ້າງທີ່ສຸດຂອງໃບທີ 4 ຂອງພືດ sorghum 3 ຊະນິດທີ່ມີອາຍຸ 15 ວັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຫນຶ່ງແຜ່ນຕໍ່ໃບຈາກສອງພືດແລະສອງແຜ່ນຈາກພືດຫນຶ່ງ, ດ້ວຍແຜ່ນທີສອງກາຍເປັນການຄວບຄຸມນ້ໍາ (ເບິ່ງຂ້າງລຸ່ມນີ້).ແຜ່ນໄດ້ຖືກເລື່ອນເປັນສ່ວນບຸກຄົນໃນ 50 µl H20 ໃນແຜ່ນ 96 ດີສີດໍາ, ຜະນຶກເຂົ້າກັນດ້ວຍປະທັບຕາອາລູມິນຽມເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຖືກແສງ, ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງໃນຕອນກາງຄືນ.ໃນຕອນເຊົ້າມື້ຕໍ່ມາ, ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກຜະລິດໂດຍໃຊ້ 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog #120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog #P6782), ແລະ. 100 mg/ml Chitin ຫຼື 2 μM ຂອງ Flg22.50 µl ຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍານີ້ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ສາມໃນສີ່ຂອງນ້ໍາ.ນໍ້າສ້າງທີ່ສີ່ແມ່ນການຄວບຄຸມແບບຈໍາລອງ, ເຊິ່ງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາທີ່ບໍ່ລວມເອົາ MAMP ໄດ້ຖືກເພີ່ມ.4 ຂຸມເປົ່າທີ່ບັນຈຸພຽງແຕ່ນ້ໍາໄດ້ຖືກລວມຢູ່ໃນແຕ່ລະແຜ່ນ.
ຫຼັງຈາກເພີ່ມການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ, ແສງສະຫວ່າງໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍໃຊ້ SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) ທຸກໆ 2 ນາທີເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ.ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນຈະວັດແທກການສ່ອງແສງທຸກ 2 ນາທີໃນລະຫວ່າງ 1 ຊົ່ວໂມງນີ້.ຜົນລວມຂອງການອ່ານທັງ ໝົດ 31 ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ເພື່ອໃຫ້ມູນຄ່າຂອງແຕ່ລະຂຸມ.ຄ່າຄາດຄະເນສໍາລັບການຕອບສະຫນອງ MAMP ສໍາລັບແຕ່ລະ genotype ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ເປັນ (ຄ່າ luminescence ສະເລ່ຍຂອງສາມຂຸມທົດລອງ - ມູນຄ່າ mock well) - ລົບຄ່າສະເລ່ຍຂອງ blank well.ຄ່າຂອງຂຸມເປົ່າແມ່ນຢູ່ໃກ້ກັບສູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ.
ແຜ່ນໃບຂອງNicotiana benthamiana, ຫນຶ່ງເສັ້ນ sorghum ຕອບສະຫນອງສູງ (SC0003), ແລະຫນຶ່ງສາຍ sorghum ຕອບສະຫນອງຕ່ໍາ (PI 6069) ຍັງໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າເປັນການຄວບຄຸມໃນແຕ່ລະແຜ່ນ 96-well ສໍາລັບຈຸດປະສົງການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ.
B. Cookeiການກະກຽມ inoculum ແລະ inoculation
B. Cookeiinoculum ໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.ໂດຍຫຍໍ້, ເມັດເຂົ້າຈ້າວຖືກແຊ່ນ້ໍາໃນສາມມື້, ລ້າງ, ຖອກໃສ່ກະປ໋ອງຮູບຈວຍ 1L ແລະ autoclaved ສໍາລັບຫນຶ່ງຊົ່ວໂມງຢູ່ທີ່ 15psi ແລະ 121 ° C.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເມັດພືດໄດ້ຖືກ inoculated ດ້ວຍປະມານ 5 ml ຂອງ mycelia macerated ຈາກວັດທະນະທໍາສົດຂອງB. CookeiLSLP18 ແຍກອອກແລ້ວປະໄວ້ 2 ອາທິດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ສັ່ນແກ້ວທຸກໆ 3 ມື້.ຫຼັງຈາກ 2 ອາທິດ, ເຊື້ອລາທີ່ຕິດເຊື້ອເມັດເຂົ້າສາລີໄດ້ຖືກຕາກອາກາດໃຫ້ແຫ້ງແລ້ວເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ° C ຈົນກ່ວາການປູກຝັງ.inoculum ດຽວກັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການທົດລອງທັງຫມົດແລະເຮັດໃຫ້ສົດທຸກໆປີ.ສໍາລັບການປູກຝັງ, ເມັດພືດທີ່ຕິດເຊື້ອ 6-10 ໄດ້ຖືກຈັດໃສ່ເຂົ້າໄປໃນ whorl ຂອງພືດ sorghum ອາຍຸ 4-5 ອາທິດ.spores ທີ່ຜະລິດຈາກເຊື້ອເຫັດເຫຼົ່ານີ້ລິເລີ່ມການຕິດເຊື້ອໃນຕົ້ນ sorghum ອ່ອນພາຍໃນຫນຶ່ງອາທິດ.
ການກະກຽມແກ່ນ
ກ່ອນທີ່ຈະປູກໃນພາກສະຫນາມ sorghum ແກ່ນໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍຢາຂ້າເຊື້ອລາ, ຢາຂ້າແມງໄມ້, ແລະປະສົມທີ່ປອດໄພທີ່ມີ ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, 3% Sorpro 940 ES seed safer.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແກ່ນໄດ້ຖືກຕາກແດດໃຫ້ແຫ້ງເປັນເວລາ 3 ມື້, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມີການເຄືອບບາງໆຂອງເມັດປະມານ.ຄວາມປອດໄພອະນຸຍາດໃຫ້ໃຊ້ຢາຂ້າຫຍ້າ Dual Magnum ເປັນການປິ່ນປົວກ່ອນການເກີດ.
ການປະເມີນຜົນຄວາມຕ້ານທານຈຸດທີ່ໃບເປົ້າຫມາຍ
SCP ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ທີ່ສະຖານີຄົ້ນຄວ້າການປູກພືດກາງໃນ Clayton, NC ໃນວັນທີ 14-15 ເດືອນມິຖຸນາ 2017 ແລະ 20 ເດືອນມິຖຸນາ 2018 ໃນການອອກແບບທ່ອນໄມ້ທີ່ສົມບູນແບບສຸ່ມທີ່ມີການທົດລອງທົດລອງສອງຢ່າງໃນແຕ່ລະກໍລະນີ.ທົດລອງປູກເປັນແຖວດ່ຽວ 1.8 ມ ມີຄວາມກວ້າງແຖວ 0.9 ມ ໂດຍໃຊ້ແກ່ນ 10 ເມັດຕໍ່ຕົ້ນ.ສອງແຖວຊາຍແດນໄດ້ຖືກປູກອ້ອມຮອບຮອບນອກຂອງແຕ່ລະການທົດລອງເພື່ອປ້ອງກັນຜົນກະທົບຂອງຂອບ.ໄດ້ມີການທົດລອງປູກໃນວັນທີ 20 ກໍລະກົດ 2017 ແລະ ວັນທີ 20 ກໍລະກົດ 2018 ເຊິ່ງຈຸດທີ່ຕົ້ນເຂົ້າຈ້າວຢູ່ໃນຂັ້ນຕອນການຈະເລີນເຕີບໂຕທີ 3. ໄດ້ມີການປະເມີນລະດັບໜຶ່ງຫາເກົ້າ, ເຊິ່ງພືດທີ່ບໍ່ມີອາການຂອງພະຍາດໄດ້ຄະແນນເປັນເກົ້າ ແລະ ສົມບູນ. ພືດທີ່ຕາຍແລ້ວໄດ້ຄະແນນເປັນອັນນຶ່ງ.ສອງຄະແນນໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນປີ 2017 ແລະການອ່ານສີ່ຄັ້ງໃນປີ 2018 ເລີ່ມຕົ້ນສອງອາທິດຫຼັງຈາກການ inoculation ໃນແຕ່ລະປີ.sAUDPC (ພື້ນທີ່ມາດຕະຖານພາຍໃຕ້ເສັ້ນໂຄ້ງຄວາມຄືບຫນ້າຂອງພະຍາດ) ຖືກຄິດໄລ່ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.
ເວລາປະກາດ: 01-01-2021